تقنية التألق المناعي مزدوجة العلامات لتصور بروتينات المضيف ومسببات الأمراض في الخلية المصابة
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:44 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بالخلايا الظهارية الثابتة والمتنفذة المصابة بطفيلي ممرض
أضف حاجزا مؤقتا لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.
تراكب مع الأجسام المضادة الأولية متعددة النسيلة للفأر ، تتفاعل على وجه التحديد مع بروتينات الطفيلي.
أضف الأجسام المضادة الثانوية ذات اللون الأحمر البعيد المسمى بالفلوروفور والتي تتفاعل مع الأجسام المضادة الأولية المرتبطة بالبروتين الطفيلي.
يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة. كتلة الأجسام المضادة للفئران التي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية ، مما يقلل من التفاعل المتبادل أثناء وضع العلامات على البروتين المضيف.
أضف الأجسام المضادة الأولية أحادية النسيلة للفأر التي تستهدف البروتينات النووية الريبية المضيفة داخل الخلايا الظهارية.
تراكب بمزيج من الأجسام المضادة الثانوية المسماة بالفلوروفور الأخضر والفالودين المترافق بالفلوروفور الأحمر ، مما يسهل وضع العلامات على الأجسام المضادة الأولية المرتبطة بالبروتين المضيف والأكتين ، على التوالي.
يغسل بمخزن مؤقت. قم بالتركيب باستخدام وسيط يحتوي على صبغة الحمض النووي ، مما يضفي لونا أزرق على النواة المضيفة ونواة الطفيليات والحركية.
تحليل العينات باستخدام مجهر متحد البؤر. تظهر تقنية التألق المناعي مزدوج العلامات بروتينات المضيف الخضراء والبروتينات الطفيلية الحمراء ، مما يتيح توطينها الدقيق تحت الخلايا.
أضف خلايا LLC-MK2 في ألواح
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية