السلوكي الصيدلة في الإشراط الكلاسيكي للاستجابة ملحق خرطوم في نحل العسل ( أبيس mellifera)

نحن لشرح كيفية تنفيذ أسلوب الصيدلة السلوكية في تكييف نموذج الشمية ترغبي في نحل العسل (أبيس mellifera) عن طريق التطبيق المنهجي للمخدرات. هذا الأسلوب يسمح التحقيق في آليات التعلم وتكوين الذاكرة الكامنة في طريقة بسيطة وموثوق بها.

الهدف العام من هذا الإجراء هو دراسة الآليات الجزيئية الكامنة وراء التعلم وتكوين الذاكرة. في نحل العسل ، تتمثل الخطوة الأولى في جمع النحل الطائر مجانا من خليته. بعد ذلك ، يتم تسخير النحل في أنابيب بلاستيكية.

الخطوة الثالثة من الإجراء هي إجراء التكييف الكلاسيكي. يمكن حقن المخدرات في نقاط زمنية معينة حول التكييف من أجل دراسة تأثيرها على التعلم وتكوين الذاكرة. الخطوة الأخيرة من الإجراء هي اختبار الاحتفاظ بالذاكرة.

في النهاية ، قد تكشف التغييرات في السلوك بعد العلاج بالعقاقير عن الآليات الجزيئية الكامنة وراء التعلم وتكوين الذاكرة. في نحل العسل. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الشحذ والذاكرة من خلال الكشف عن الآليات الجزيئية لتكوين الذاكرة.

بشكل عام ، سيواجه الباحثون الجدد في هذه الطريقة صعوبات لأن توقيت عرض المحفزات أثناء التكييف واسترجاع الذاكرة يجب أن يكون دقيقا. أيضا ، نظام التغذية أمر بالغ الأهمية. سيتم عرض الإجراء عن طريق قطع التروس ويوهانس فابيرج لطلاب الدراسات العليا من مختبري في اليوم السابق للتجربة ، اجمع النحل بين الساعة الثانية و 4:00 مساء باستخدام هرم زجاج شبكي منفذ للأشعة فوق البنفسجية.

بمجرد العودة إلى المختبر ، ضع الهرم على قاعدته وقم بتغميق الجدران بمنشفة مع ترك القمة مكشوفة. افتح القمة وأمسك قارورة زجاجية فوق الفتحة ، مما يسمح لنحلة واحدة بالانتقال إلى القارورة قبل إعادة الإغلاق. استمر في هذا الإجراء حتى يتم نقل جميع النحل إلى قارورة زجاجية في الخريف والشتاء.

عندما لا يطير النحل في الخارج ، يتم الاحتفاظ بخلية نحل داخل دفيئة في شبكة ، ويتم اصطياد النحل الفردي مباشرة من الشبكة. باستخدام قارورة زجاجية واحدة لكل ب ، قم بشل حركة النحلة عن طريق تبريد القارورة على الثلج لمدة دقيقتين ونصف إلى ثلاث دقائق ونصف. راقب النحلة بعناية وقم بإزالتها من الجليد بمجرد توقفها عن الحركة.

تسخير النحلة الثابتة في أنبوب بلاستيكي صغير بشريط لاصق. تأكد من أن النحلة قادرة على تحريك مرض المرض بحرية ، ولكن ليس رأسها أو صدرها أو ساقيها. من المهم أيضا عدم ضغط الرقبة.

بمجرد تحضير نحلة. ضع الأنبوب في بئر مرقم على الرف. لتحسين التعامل وتحديد الهوية.

يتم إرجاع الأنابيب دائما إلى نفس البئر. بعد المناولة ، قم بإطعام النحل بين الساعة 4 و 6:00 مساء في مكان مختلف عن موقع التكييف. استنباط استجابة تمديد Probos أو PER عن طريق لمس النحل والهوائيات.

باستخدام محلول السكروز ، اسمح للنحلة باستهلاك قطرة واحدة من حوالي أربعة ميكرولترات من محلول SRAs. تأكد من عدم تشويه النحلة على هوائيات أو برو بوا أو أنبوب بلاستيكي. أطعم كل نحلة حتى تختفي.

أظهر PER سريعا وموثوقا به عندما تلامس الهوائيات الخاصة بهم بالحل. في الأمسيات اللاحقة من التجربة ، قم بإطعام كل نحلة أربع مرات بقطرة واحدة من محلول السكروز. املأ وعاءا بلاستيكيا يبلغ ارتفاعه حوالي 0.5 إلى سنتيمتر واحد بماء الصنبور.

ضع رف النحل المسخر في الوعاء باستخدام أطباق ليزا كمنصة. غطي الوعاء بالورق المقوى واحفظيه في درجة حرارة الغرفة. ضحاها. يخضع النحل لتكييف حاسة الشم حوالي الساعة 10:00 صباحا في صباح اليوم التالي للجمع.

قبل 30 دقيقة من بدء التجربة. ضع رف نحل تسخير بالقرب من موقع التكييف ، ولكن بعيدا عن فتحة أنبوب العادم حيث سيتم تدريب النحل. بعد ذلك ، قم بإعداد محفز الحالة الذي يعمل في غطاء محرك السيارة.

استخدم طرف مرشح لماصة أربعة ميكرولترات من زيت القرنفل على ورق ترشيح دائري. ضع ورق الترشيح المعطر في حقنة سعة 20 مليلتر وأدخل المكبس. اضبط مشغل الصوت الذي سيقدم إشارة صوتية إلى المجري.

هذا يضمن التوقيت الدقيق للتحفيز ، وبداية التحفيز ، وتحفيز الإزاحة ، والمدة ، والوضع. استعد لتسجيل سلوك النحلة طوال فترة التكييف. يتم إعطاء درجة إيجابية إذا مددت النحلة SSIS بين بداية محفز الحالة وعرض الحافز غير المشروط.

عبور خط افتراضي بين الفك السفلي المفتوح لبدء تجربة الاستحواذ ، حدد النحلة المراد تدريبها وضعها أمام العادم لمدة 10 ثوان. قبل وقت قصير من نهاية هذه الفترة العشر ثوان ، ضع الرائحة التي تحتوي على حقنة على بعد ثلاثة سنتيمترات من النحل والهوائيات. قدم الرائحة على مدى خمس ثوان عن طريق دفع 20 مل من الهواء عبر المحقنة.

بعد ثلاث ثوان ، أدخل الحافز غير المشروط عن طريق لمس الجزء البطني من السوط البعيد لكل من الهوائيات بمحلول السكروز ، رطب وعود أسنان. مع الحرص على عدم إيداع المحلول على النحل والهوائيات ، يسمح بعد ذلك للنحلة بلعق عود الأسنان. يستمر هذا الحافز المركب أربع ثوان حيث تتم إزالة النحل من سياق التدريب وإعادته إلى الرف.

بعد 13 ثانية من عرض حافز الحالة ، تستمر تجربة تدريب واحدة 28 ثانية. أعد النحلة إلى موقع التدريب بعد فترة زمنية بين التجارب مدتها 10 دقائق. قم بإجراء التجارب الثانية من ثلاث تجارب كما هو موضح سابقا ، وانتظر 10 دقائق إضافية قبل إجراء الاقتران النهائي.

بعد اكتمال التدريب لهذا اليوم ، ضع الرفوف مرة أخرى في الوعاء. تذكر أن تطعم كل نحلة أربع مرات بقطرة واحدة من محلول السكروز سعة أربعة ميكرولتر بين الساعة الرابعة و 6:00 مساء كما هو موضح سابقا ، يمكن إجراء اختبارات الاحتفاظ في أي فاصل زمني من دقائق إلى أيام بعد التدريب. استعد لاختبار الذاكرة عن طريق وضع رف النحل بالقرب من موقع التكييف لمدة 30 دقيقة.

ابدأ الاختبار عن طريق وضع نحلة أمام العادم لمدة 10 ثوان. قدم محفز الحالة لمدة خمس ثوان ولاحظ حدوث PER. بعد اكتمال الاختبار لهذا اليوم ، ضع الرفوف مرة أخرى في الوعاء.

تذكر أن تطعم كل نحلة أربع مرات بقطرة واحدة من محلول السكروز بحجم أربعة ميكرولتر بين الساعة الرابعة و 6:00 مساء كما هو موضح سابقا في نهاية التجربة بأكملها ، وتحقق من أن النحلة لا تزال قادرة على تمديد مباركها عن طريق لمس الهوائيات بمحلول SRAs ليتم تضمينه في التحليل ، يجب أن ينجو النحل من التجربة بأكملها وأن يكون لديه PER سليم. في بعض الدراسات ، يتم استخدام الحقن الجهازية لدراسة تأثير التدخلات الدوائية على الذاكرة الشمية. يمكن تسليم هذه الحقن في أوقات مختلفة اعتمادا على تصميم التجربة.

للبدء ، قم بعمل ثقب صغير في الجلد من الجزء الخلفي من سكوتين S بالقرب من شق S scootle فوق عضلة الطيران ، باستخدام إبرة تحت الجلد يمكن التخلص منها. بعد ذلك ، املأ أنبوبا شعريا زجاجيا بميكرولتر واحد من المحلول المراد اختباره. أدخل الشعيرات الدموية في الفتحة الموجودة في الجلد وحقن المحلول في عضلة الطيران.

المجربون المدربون قادرون على حقن B واحد كل 30 ثانية ، مما يسمح بتوقيت دقيق للحقن والتكييف. يتم تقديم تجربتين هنا. تدرس التجربة الأولى تأثير الحقن الجهازي للمحلول الملحي الذي يتم إجراؤه قبل التدريب على تعلم الذاكرة.

هناك ثلاث مجموعات في هذه الدراسة ، مجموعة لا تتلقى أي علاج ، أو حقن جهازي ميكرولتر واحد من محلول ملحي مخزن بالفوسفات ، أو مجموعة زائفة. تم إعطاء هذه العلاجات قبل 30 دقيقة من التدريب الموضح هنا على اليسار. زادت النسبة المئوية للحيوانات التي أظهرت الاستجابة المشروطة أثناء الاستحواذ عبر التجارب التدريبية الثلاث مع عدم وجود فروق بين المجموعات.

تظهر الرسوم البيانية الشريطية الموجودة على اليمين أنه لم يؤثر حقن PBS ولا الآفة الوهمية على الاحتفاظ بالذاكرة. بعد 24 ساعة من التدريب في التجربة الثانية ، تم إعطاء الحقن بعد 40 دقيقة بعد التدريب ، تم تقسيم النحل إلى مجموعة واحدة تتلقى المحلول الملحي وأخرى تتلقى ميكرولتر واحد من مثبط تخليق البروتين و ESO mycin تظهر الرسوم البيانية الشريطية على اليمين انخفاضا واضحا في الاحتفاظ بالذاكرة لدى النحل الذي يتلقى أنيسا مايسين. تسلط هذه النتائج الضوء على أهمية تخليق البروتين في تكوين الذاكرة الشمية.

بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء تسجيلات فيزيولوجية كهربية وفيزيولوجية كهربية من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل ما هو الأساس الفيزيولوجي العصبي للتعلم وتكوين الذاكرة بعد تطوره؟ مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال التعلم وأبحاث الذاكرة لاستكشاف الآلية الجزيئية والفيزيولوجية العصبية في تكوين الذاكرة في نحل العسل.