Name: عضوي النمط من الثقافة شريحة GFP - معربا عن أجنة الفئران لريال مدريد في الوقت ثمرة تصوير الأعصاب الطرفية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-29T11:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 42 s
Description: تعلم إعداد شرائح عضوية من أجنة الفئران المعبّر عنها بـGFP لدراسة نمو الأعصاب الشوكية في الأطراف الأمامية باستخدام المجهر الضوئي الفلوري. هذه الطريقة تتيح مراقبة التطور العصبي المحيطي في الوقت الحقيقي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

الكتاب يعترف المصدر الأصلي للفكرة لأداء ثقافة شريحة على أجنة الفئران 5. نود أن نعترف يواكيم كيرش للحصول على الدعم السخي والعلمية ديجين آنا لدينا بوصفها gofer أثناء التصوير. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل مؤسسة البحوث الألمانية (دويتشه Forschungsgemeinschaft : Sonderforschungsbereich 488 ، Teilprojekt B7/B9) ، وجامعة هايدلبرغ (التميز الكتلة الشبكات الخلوية).

الجزء 1 : الاستعداد للتشريح والتثقيف. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد لوحات 10 سم ، وزراعة الأنسجة مع تشريح المتوسطة (DMEM ، و 25 ٪ HBSS 1X ، و 25 ٪ مصل بقري جنيني والجلوكوز بنسبة 0.5 ٪ ، 1 الجلوتامين ملي و 2.5 ملي HEPES ، ودرجة الحموضة 7.3) و 3 سم Millicell - CM - 0.4 ميكرومتر الثقافة إدراج والحفاظ على غشاء في الحاضنة في 37 درجة مئوية و 5 ٪ CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حرارة منخفضة بنسبة 4 ٪ نقطة ذوبان agarose في برنامج تلفزيوني في الميكروويف وابقائه على لوحة التسخين بحيث يبقى في حوالي 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء 10 سم ، والبكتريولوجية أطباق بتري مع برنامج تلفزيوني (140 ملي مول كلوريد الصوديوم ، و 2.7 ملي بوكل ، 10 ملي نا 2 هبو 4 ، ص 2 1.8mM KH 4) ووضعت على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مشراح جهاز التبريد أو ضمان تخزين وتبريد علبة عازلة العناصر في الثلاجة لتبرد قبل ذلك. </li></ol> الجزء 2 : تضمين الأجنة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الأجنة من الرحم ودراستها مع مجهر مقلوب an الفلورسنت للتحقق من التعبير GFP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجنة مكان في صحن مقلوب بيتري 10 سم ، وتوجيهها باستخدام شرائط الورق Whatman لإزالة PBS المفرطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنطبق على agarose جنين لاصلاحها في هذا الموقف. اسمحوا agarose يصلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحد من المنطقة المحيطة بها الجنين عن طريق خفض بشفرة حلاقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدوير الجنين جزءا لا يتجزأ من على الجانب الآخر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق agarose إضافية على الأنسجة الجنينية للتأكد من أن يتم تضمين تماما الجنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد agarose كتلة مع حواف نظيفة وعلى جبل تشوك vibratome باستخدام وكتايت 406 ، الغراء خاص يشبه "الغراء Krazy". </li></ol> الجزء 3 : التقطيع الداخلي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد علبة عازلة precooled وعنصر التبريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج تشوك مع نسيج لاصق وإضافة 1X HBSS (كا 2 + 2 + ملغ خالية HBSS ، 10 العازلة HEPES الرقم الهيدروجيني 7.3 ملليمتر و 500 U / البنسلين مل / الستربتوميسين) حتى تغطيتها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج وإصلاح precleaned شفرة مشراح (70 ٪ إيثانول). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أبقى شرائح 450 ميكرون ونقلها باستخدام الزجاج تقصير ماصات باستور في زراعة الأنسجة لوحات على الجليد -- إعداد 350. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام زوج من الملقط ، agarose إزالة بعناية من كل شريحة ، ونقل إلى Millicell الأغشية الثقافة. يمكن تربيتها حوالي 4 شرائح على واحد في لوحة الغشاء نسيج الثقافة 10 سم ، وملأت مع 6 مل من المتوسط ​​الثقافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان شرائح عند 37 درجة مئوية و 5 ٪ CO 2 (متوسطة الثقافة : DMEM ، و 25 ٪ HBSS 1X ، و 25 ٪ مصل بقري جنيني والجلوكوز بنسبة 0.5 ٪ ، 1MM الجلوتامين ، و 2.5 ملي HEPES ، ودرجة الحموضة 7.3). إذا كان واحد ينفذ الوقت الفاصل بين التصوير سلسلة ينبغي للمرء أن إبقاء حجم ثابت المتوسطة. في حالة من سلسلة توقيت التصوير لفترة زمنية قصيرة يكفي لمغادرة المتوسط ​​كما هو عليه. الثقافة لمدة أطول فترات التغييرات الموصى بها بعد 12-20 ساعة. </li></ol> الجزء 4 : التصوير ثمرة العصب الشوكي في المجهر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صورة الأعصاب في العمود الفقري بوضع زراعة الأنسجة 10 سم ، لوحة ، والتي تحتوي على أغشية الثقافة Millicell مع شرائح ، تحت مجهر الفلورسنت تستقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمية اتجاه الأغشية الثقافة Millicell على خشبة المسرح المجهر لموقف صحيح أثناء التصوير نقطة في المرة القادمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثمرة صورة العصب الشوكي باستخدام 4X (الفتحة العددية [NA] 0.1) ، 10X (NA 0.3) ، أو 20X (NA 0.5) الأهداف. </li></ol> الشكل 1 يبين سلسلة التصوير تصور ثمرة العصب الفقري خلال 20 ساعة من الثقافة مع أهداف 4x و10X. <img src="/files/ftp_upload/2309/2309fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> سلسلة التصوير الرقم 1 من ثمرة العصب الشوكي في شريحة عرضية من جنين tauGPF متماثل. * = الخلايا العصبية الحركية في الحبل الشوكي بطني ، السهم = DRG. وأشار الظهراني (D) - بطني (V) محور شريحة. Scalebars : 200 ميكرومتر.

<ol><li>Tucker, K. L., Meyer, M., Barde, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophins+are+required+for+nerve+growth+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurotrophins are required for nerve growth during development.</a> Nat Neurosci. 4, 29-37 (2001).</li>
<li>Brachmann, I., Jakubick, V. C., Shaked, M., Unsicker, K., Tucker, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+slice+culture+system+for+the+imaging+of+nerve+development+in+embryonic+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">A simple slice culture system for the imaging of nerve development in embryonic mouse.</a> Dev Dyn. 236, 3514-3523 (2007).</li>
<li>Collingridge, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+slice+preparation%3A+a+tribute+to+the+pioneer+Henry+McIlwain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience+methods%22%5BJournal%5D)">The brain slice preparation: a tribute to the pioneer Henry McIlwain.</a> Journal of neuroscience methods. 59, 5-9 (1995).</li>
<li>Katz, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+circuitry+of+identified+projection+neurons+in+cat+visual+cortex+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Local circuitry of identified projection neurons in cat visual cortex brain slices.</a> J Neurosci. 7, 1223-1249 (1987).</li>
<li>Hotary, K. B., Landmesser, L. T., Tosney, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryo+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Embryo slices.</a> Methods Cell Biol. 51, 109-124 (1996).</li>
</ol>

في المقارنة واسعة من الأساليب لإعداد الثقافات شريحة الجنينية من أجنة فئران في منتصف الحمل (E10 -- E12) ، وقد لاحظنا أن vibratome تنتج دون شك نتائج الأكثر موثوقية فيما يتعلق جدوى على حد سواء العام للثقافات واستنساخ أنماط ثمرة العصبية. في المقابل ، أعدت شرائح الأنسجة باستخدام المروحية McIlwain 3 ثبت أن inviable تماما. نحن العاملين في الأصل طريقة المقصلة 4 ، التي يمكن أن تكون القمامة بأكمله في وقت واحد على استعداد للأجنة عن طريق تشريح مع أسلاك التنجستين ملفوفة ح...

<table><tbody><tr><td>محلول HBSS بتركيز 10x</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>14180</td><td></td></tr><tr><td>أدوات التشريح</td><td>Fine Science Tools</td><td>متنوعة</td><td></td></tr><tr><td>أجاروز L.M.P.</td><td>Invitrogen</td><td>15517-022</td><td></td></tr><tr><td>ورق واتمان (Whatman)</td><td>Whatman, GE Healthcare</td><td>3030917</td><td></td></tr><tr><td>ماصات مصقولة بالنار ومقصرة</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>وسط DMEM</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>41966</td><td></td></tr><tr><td>مصل جنين البقر</td><td>GIBCO، من شركة Life Technologies</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>البنسلين والستربتومايسين</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>إل-جلوتامين 100x</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>جهاز التقطيع الاهتزازي (Vibratome)</td><td>مايكروم إنترناشيونال (Microm International)</td><td>HM 650 V</td><td></td></tr><tr><td>المجهر الفلوري</td><td>شركة Olympus Corporation</td><td>BX61WI</td><td></td></tr><tr><td>تحليل</td><td>نظام التصوير اللين</td><td></td><td></td></tr><tr><td>رقائق Millicell-CM</td><td>EMD Millipore</td><td>PICMORG 50</td><td></td></tr><tr><td>أطباق زراعة بحجم 10 سم</td><td>Greiner Bio-One</td><td>633171</td><td></td></tr><tr><td>LOCTITE 406</td><td>شركة هنكل (Henkel Corp)</td><td>142580</td><td></td></tr><tr><td>شفرات حلاقة</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>يرجى تزويدي بالنص المصدر الذي ترغب في ترجمته. أنا جاهز لبدء العمل وفقاً للإرشادات المذكورة.</td><td></td></tr><tr><td>مجهر التشريح</td><td>أجهزة Nikon</td><td>SMZ800</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Carl Roth Gmbh</td><td>9105.2</td><td></td></tr><tr><td>الجلوكوز</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>عدسة شيئية بقوة تكبير 4x</td><td>Olympus Corporation</td><td>سلسلة PL</td><td></td></tr><tr><td>عدسة شيئية بقوة تكبير 10x</td><td>شركة Olympus Corporation</td><td>UPLFL &amp;#8211;سلسلة PH</td><td></td></tr><tr><td>مرشح</td><td>شركة أوليمبوس (Olympus Corporation)</td><td>U-MNIBA2</td><td></td></tr><tr><td>كاميرا ذات جهاز اقتران شحني (CCD)</td><td>نظام التصوير المرن</td><td>SIS F-View II</td><td></td></tr><tr><td>معدات الغرفة المسخنة</td><td>Leica Microsystems</td><td>جهاز التحكم CTI-Controller 3700 والحاضنة S رقم 11531171</td><td></td></tr></tbody></table>

عضوي النمط من الثقافة شريحة gfp - معربا عن أجنة الفئران لريال مدريد في الوقت ثمرة تصوير الأعصاب الطرفية

Organotypic Slice Culture of GFP-expressing Mouse Embryos for Real-time Imaging of Peripheral Nerve Outgrowth

لأغراض كثيرة ، وزراعة الأجنة الحية الماوس السابقين وشرائح عضوي النمط غير مرغوب فيه. على سبيل المثال ، ونحن توظيف خط الماوس المعدلة وراثيا (tauGFP) الذي يعبر حصرا نسخة مطورة من البروتين الفلوري الأخضر (EGFP) في جميع الخلايا العصبية في تطور الجهاز العصبي المركزي والمحيطي 1 ، مما يسمح لكلا احتمال الفيلم من تعصيب وforelimb والتلاعب هذه العملية مع تقنيات والدوائية الجينية 2. المعلمة الأكثر أهمية في زراعة ناجحة لشريحة الثقافات مثل هذا الأسلوب الذي يتم إعداد الشرائح. بعد اختبارات مكثفة من مجموعة متنوعة من الأساليب ، أننا وجدنا أن vibratome هو الجهاز الأمثل لشريحة الأجنة بحيث يؤدي بشكل روتيني في ثقافة الذي يوضح جدوى على مدى أيام عدة ، والأهم من ذلك أنه في عصر تتطور بطريقة محددة. في منتصف الحمل الأجنة ، ويشمل هذا نتاج طبيعي للأعصاب العمود الفقري من الحبل الشوكي والعقد الجذرية الظهرية إلى أهدافهم في محيط والتصميم السليم للأنسجة العضلات والهيكل العظمي. في هذا العمل ، فإننا نقدم وسيلة لمعالجة الأجنة كلها اليوم الجنينية (E) E10 E12 لفي 300 -- 400 ميكرومتر شرائح لزراعة الأنسجة في حاضنة الثقافة الموحدة ، والتي يمكن دراستها لمدة تصل إلى يومين بعد إعداد شريحة. حاسمة بالنسبة لنجاح هذا النهج هو استخدام vibratome لشريحة كل جنين agarose جزءا لا يتجزأ. ويتبع ذلك عن طريق زراعة شرائح عند إدراج Millicell غشاء الثقافة وضعت بناء على حجم صغير من المتوسط ​​، مما أدى إلى واجهة تقنية الثقافة. القمامة واحدة بمتوسط ​​7 أجنة بشكل روتيني وتنتج ما لا يقل عن 14 شرائح (2-3 شرائح من منطقة جنين في forelimb) ، والذي يختلف قليلا بسبب عمر الأجنة وكذلك سمك الشرائح. حوالي 80 ٪ من الشرائح المثقفة تظهر ثمرة العصبية ، والتي يمكن قياسها على زراعة 2 througout الفترة. وأظهرت النتائج ممثل باستخدام سطر tauGFP الماوس.

نقدم طريقة لتحضير شرائح عضوي النمط من أجنة فئران في منتصف الحمل للزراعة والتصوير مرور الوقت ، من ثمرة الأعصاب الطرفية.

عضوي النمط من الثقافة شريحة GFP - معربا عن أجنة الفئران لريال مدريد في الوقت ثمرة تصوير الأعصاب الطرفية

لأغراض عديدة، يكون استزراع أجنة الفئران خارج الجسم (ex vivo) على هيئة شرائح نمطية عضوية (organotypic slices) أمراً مرغوباً. فعلى سبيل المثال، نستخدم سلالة فئران معدلة وراثياً (tauGFP) في ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحضير شرائح مستعرضة نمطية عضوية لمنطقة الطرف الأمامي لأجنة الفئران التي تعبر عن GFP لتصوير نمو الأعصاب الشوكية. ويتم تحقيق ذلك من خلال غمر الأجنة أولاً في مادة aros ذات نقطة انصهار منخفضة وحصر منطقة النسيج ومادة aros في المنطقة المستهدفة. ثم يتم تثبيت كتلة aros من أجل التقطيع.بعد ذلك، يتم تقطيع الأجنة المدمجة في القالب باستخدام جهاز الاهتزاز (vibrator). وتتمثل الخطوة النهائية من الإجراء في إزالة الأروس (aros) المحيطة بالشرائح ونقل هذه الشرائح إلى أطباق الزرع. ثم تُزرع الشرائح وتظهر نمواً للأعصاب الطرفية نحو المحيط، وهو ما يمكن مراقبته باستخدام المجهر الفلوري.تتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية، مثل المقصلة أو مفرمة الأنسجة، في أن الشرائح يتم إنتاجها بطريقة أكثر ضبطاً وتظهر حيوية محسنة في المزرعة. ولذلك، يمكن أن تساعد هذه الطريقة في دراسة البيولوجيا العصبية التطورية، مثل فحص توجيه ونمو الأعصاب الشوكية، وستقوم إيزابيل بارمان بتوضيح هذا الإجراء. ابدأ هذا الإجراء بتجهيز أطباق زرع أنسجة بحجم 10 سنتيمتر تحتوي على 6 ملليلتر من وسط الزرع، وأدوات إدخال غشائية للزرع من نوع milli cell cm بحجم 3 سنتيمتر ومسامية 0.4 ميكرون.احتفظ بها في الحاضنة عند 37 درجة Celsius و5% من ثاني أكسيد الكربون. بعد ذلك، قم بتسخين 4% من الـ aros منخفض نقطة الانصهار في PBS باستخدام الميكروويف، وضعه على لوح تسخين للحفاظ عليه عند درجة حرارة 37 درجة Celsius تقريبًا. املأ أطباق بتري البكتريولوجية بحجم 10 سنتيمتر بـ PBS وضعها على الثلج.بعد ذلك، قم بتركيب جهاز تبريد Viome. احفظ صينية المحلول المنظم وعناصر التبريد في المجمّد حتى تتجمد تماماً لإجراء عملية طمر الأجنة. ابدأ أولاً بتشريح الأجنة من الرحم.افحصها باستخدام مجهر فلوري مقلوب وتحقق من تعبير GFP. بعد ذلك، ضع الأجنة في طبق بتري مقلوب بقطر 10 سنتيمتر، واستخدم شرائط ورق واتمان لتوجيهها، ثم أزل فائض محلول PBS. ضع مادة aros على الجنين من أجل تثبيته.في الوضع الموجه، انتظر حتى يتصلب الـ aros، ثم قم بقص الزوائد من الـ aros، وإذا رغبت في ذلك، قم بقص الأنسجة المحيطة بالجزء الأوسط من الجنين. أدر الجنين المغمور إلى الجانب الآخر. ضع كمية إضافية من الـ aros على أنسجة الجنين لضمان انغمار الجنين بالكامل.انتظر حتى يتصلب الـ aros. قم بتجهيز كتلة aros المدمج بها الجنين بحيث تكون حوافها نظيفة. وأخيراً، قم بلصق العينة على قرص viome باستخدام Loctite 4 0 6.قم بإعداد صينية المحلول المنظم المبردة مسبقاً وعناصر التبريد. ضع القطعة المثبتة مع النسيج الملتصق على جهاز الـ viome. أضف كمية من X-H-B-S-S إلى القطعة حتى يتم تغطية النسيج بالكامل.أدخل شفرة فيوم (viome) منظفة مسبقاً في حامل الشفرات. بعد ذلك، قم بتحضير مقاطع عرضية بسمك يتراوح بين 350 إلى 450 ميكرون تقريباً. يتم قطع كل مقطع باستخدام ميكروتوم HM six 50 V.انقل الشرائح إلى أطباق زراعة الأنسجة باستخدام ماصة زجاجية قصيرة (glass pasture pipette) واحفظها على الثلج. وباستخدام ملقط، قم بإزالة الأنسجة الزائدة بعناية من جميع الشرائح. ثم انقل الشرائح إلى أغشية زراعة الخلايا (milli cell culture membranes)، بحيث يتم ترتيب أربع شرائح على كل غشاء، وذلك في أطباق زراعة بقطر 10 سنتيمتر مملوءة بستة ملليلتر من وسط زراعة مسخن مسبقاً (prewarm culture medium).قم بتحضين الشرائح عند 37 درجة Celsius و5% carbon dioxide حتى بدء التصوير بالفاصل الزمني (time-Lapse) وبين فترات التصوير. ضع طبق زراعة الأنسجة الذي يحتوي على أغشية زراعة خلايا Millie مع الشرائح تحت مجهر فلوري رأسي، وحدد مواقع الأعصاب الشوكية وصوّر نمو العصب الشوكي باستخدام عدسات شيئية بقوة 4x أو 10x أو 20x. حدد اتجاه أغشية زراعة خلايا milli على منصة المجهر لإعادة وضعها بشكل صحيح خلال نقطة التصوير الزمنية التالية في حال عدم توفر نظام مستقر لدرجة الحرارة وcarbon dioxide.البيئة الموضحة هنا هي سلسلة تصوير لنمو الأعصاب الشوكية خلال 24 ساعة من الزراعة في شريحة مستعرضة لجنين متماثل الزيجوت لـ tau GFP. تشير النجمة إلى الخلايا العصبية الحركية في النخاع الشوكي البطني ويشير السهم إلى DRG. تم تصوير اللوحة العلوية باستخدام عدسة شيئية بقوة 4X واللوحة السفلية باستخدام عدسة شيئية بقوة 10x.بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يتكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير شرائح مستعرضة نمطية عضوية لأجنة الفئران يمكن استخدامها لتصوير نمو الأعصاب الشوكية.

organotypic-slice-culture-gfp-expressing-mouse-embryos-for-real-time

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

تصوير الأنسجة الجنينية في الوقت الحقيقي هو تحدي على مدى فترات طويلة من الزمن. نحن هنا يقدم فحص لرصد التغيرات الخلوية وشبه الخلوية في الحبل الشوكي فرخ لفترات طويلة مع ارتفاع القرار المكانية والزمانية. ويمكن تكييف هذه التقنية في مناطق أخرى من الجهاز العصبي والأجنة النامية.

عالية الدقة التصوير لايف من سلوك خلية في الظهارة العصبية النامية

نحن هنا تطوير الأدوات اللازمة...

فيفو السابقين التصوير لايف من الانقسامات الخلوية واحدة في الظهارة العصبية ماوس

يوضح هذا الفيديو ثقافة خارج الجسم الحي وتصوير الشرائح الحركية للعين من أجنة الفئران المعدلة وراثيا. الأجنة معزولة ومدمجة في الاغاروز. باستخدام الاهتزاز ، يتم الحصول على شرائح تحتوي على النوى الحركية للعين والعينين. يتم الحفاظ على الشرائح في الثقافة وتصويرها باستخدام المجهر الفلوري.

ثقافة Ex Vivo وتصوير الشرائح الحركية للعين من أجنة الفئران المعدلة وراثيا

العصبية السلف الانقسام هو معلمة الحرجة من تكوين الخلايا العصبية. ويستند جزء كبير من فهمنا لالعصبية السلف الانقسام على تحليل الأنسجة الثابتة. تصوير حي في شرائح المخ الجنينية هي تقنية متعددة لتقييم الانقسام مع القرار الزماني والمكاني عالية في بيئة تسيطر عليها.

التصوير حية من الانقسام في تطوير الجنينية الماوس اللحاء

تم وصف تقنية لدراسة خلايا NG2 والخلايا الدبقية قليلة التغصن باستخدام نظام زراعة شرائح الدماغ الأمامي والمخيخ.  تسمح هذه الطريقة بفحص ديناميكيات تكاثر وتمايز الخلايا داخل سلالة الخلايا قليلة التغصن حيث يمكن التلاعب بالبيئة خارج الخلية بسهولة مع الحفاظ على بنية الخلايا الأنسجة.

الثقافات شريحة عضوي النمط لدراسة ديناميات دبقية قليلة التغصن وتكون الميالين

نقدم هنا بروتوكولا محسنا للنمط الجيني وتلميث الفئران الجنينية وتلطيخها وإعدادها لتصوير الإسقاطات العصبية المحيطية لمستقبلات الألم في بأكمله ، كطريقة فعالة لتقييم الأنماط الظاهرية لنمو المحور العصبي الحسي في تطوير الفئران المعدلة وراثيا.

كله جبل التصوير من جنين فأر التوقعات الحسية أكسون

يوفر هذا البروتوكول تعليمات للمراقبة المباشرة من الخلايا العصبية القشرية هجرة شعاعيا. في إليكتروبوراتيون الرحم ، يتم دمج ثقافة شريحة عضوي النمط، والوقت الفاصل بين التصوير متحد البؤر لدراسة مباشرة وديناميكية آثار أوفيركسريسيون أو دونريغولاتيون من الجينات التي تهم في الخلايا العصبية المهاجرة وتحليل التمايز أثناء التنمية.

الوقت الفاصل بين التصوير متحد البؤر من الخلايا العصبية المهاجرة في شريحة عضوي نمط ثقافة الفأر الجنينية باستخدام الدماغ<em&gt; في أوتيرو</em&gt; إليكتروبوراتيون

هنا، نحن نقدم طريقة منخفضة التكلفة وموثوق بها لتوليد اليكتروبوراتيد الدماغ أورجانوتيبيك شريحة الثقافات من أجنة الفأر مناسبة للفحص المجهري [كنفوكل] وتقنيات التصوير العيش.

الرحم السابقين انهانسر والثقافات أورجانوتيبيك شريحة من أدمغة الفأر الجنينية للعيش-التصوير لترحيل إينتيرنيورونس جابايرجيك

يسمح فحص شريحة الجسم الحي السابق بالتصوير في الوقت الحقيقي. يتم إنشاء شرائح عن طريق تضمين E10.5 IslMN: GFP الأجنة في agarose، وتقطيع على الاهتزاز، وتنمو في حاضنة المرحلة العليا. يتم تقييم دور مسارات توجيه axon عن طريق إضافة مثبطات إلى وسائل الإعلام الثقافية.

السابق فيفو أوكولوموتور شريحة الثقافة من الفئران الجنينية GFP التعبير عن التصوير الفاصل الزمني من نمو الأعصاب أوكولوموتور

يوضح هذا البروتوكول طريقة مباشرة وقوية لدراسة نمو المحور العصبي في الموقع وديناميكيات مخروط النمو. وهو يصف كيفية إعداد شرائح الدماغ الحادة ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية خارج الجسم الحي ويوفر خط أنابيب تحليل سهل الاستخدام.

في الموقع تصور نمو المحور العصبي وديناميكيات مخروط النمو في مزارع شرائح الدماغ الجنينية الحادة خارج الجسم الحي

أثناء تطور القشرة الدماغية ، تنشأ الخلايا العصبية والخلايا الدبقية في منطقة البطين المبطنة للبطين وتهاجر نحو سطح الدماغ. تشارك العديد من الجينات في هذه العملية. يقدم هذا البروتوكول تقنية التصوير بفاصل زمني للخلايا العصبية المهاجرة والأسلاف الدبقية.

تصوير الفاصل الزمني للخلايا العصبية المهاجرة والأسلاف الدبقية في شرائح دماغ الفأر الجنينية

تعلم إعداد شرائح عضوية من أجنة الفئران المعبّر عنها بـGFP لدراسة نمو الأعصاب الشوكية في الأطراف الأمامية باستخدام المجهر الضوئي الفلوري. هذه الطريقة تتيح مراقبة التطور العصبي المحيطي في الوقت الحقيقي.

عضوي النمط من الثقافة شريحة GFP - معربا عن أجنة الفئران لريال مدريد في الوقت ثمرة تصوير الأعصاب الطرفية

استكشف المزيد من الفيديوهات