والعزلة في المختبر تفعيل انواع معينة ايليجانس الحيوانات المنوية

الهدف العام من هذا الإجراء هو تصور مورفولوجيا المنوية. يتم تحقيق ذلك عن طريق عزل الذكور أولا للتشريح قبل يوم واحد. الخطوة الثانية من الإجراء هي تشريح الذكور لإطلاق المنوية.

الخطوة الثالثة من الإجراء هي تصور مورفولوجيا المنوية. الخطوة الأخيرة من الإجراء هي تحضير المنوية للتطبيقات النهائية. في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج تظهر مورفولوجيا المنوية والقدرة على التنشيط من خلال العلاج باستخدام المنشطات في المختبر.

تم تطوير بروتوكول عزل المنوية وتنشيطها لأول مرة منذ أكثر من 30 عاما من قبل سام وارد وديان شيك وجريجوري نيلسون. نستخدم هذا الإجراء حاليا لتوصيف الطفرات التي تغير وظيفة المنوية وخصوبتها في أناقة C. الهدف العام من هذا الإجراء هو تصور CL elgan ، وهو مورفولوجيا المنوية OID.

يتم تحقيق ذلك عن طريق عزل الذكور قبل يوم واحد من التشريح من أجل إبقائهم عازبين. تتضمن الخطوة الثانية تشريح الذكور من أجل إطلاق المنوية المستديرة غير المشروطة. الخطوة الثالثة هي تصور تنشيط المنوية في المختبر إلى مورفولوجيا المنوية الناضجة AME.

سيتم عرض الإجراء من قبل ثلاثة زملاء ما بعد الدكتوراه في المختبر ، الدكتور مات مارشيلو ، والدكتور وتشاترجي ، والدكتور جونا SLU لعزل المنوية. أولا ، احصل على عدد كبير من الذكور عن طريق عبور خمسة ذكور من النوع البري وخنثى واحد على حديقة صغيرة من الإشريكية القولونية. بكتيريا OP 50 جالسة في وسط نمو الديدان الخيطية أو لوحة NGM.

ما يقرب من 50٪ من الجيل القادم سيكونون من الذكور البرية لجمعها. يقوم الذكور في المرحلة الأربع بفحص مرحلة النمو ومورفولوجيا الذيل تحت مجهر تشريح. يتم قطف دودة L ذات الأربع مراحل بناء على مورفولوجيا الذيل.

ذكر الدودة لها ذيل مستدير بينما الخنثى لها ذيل مدبب. باستخدام سلك بلاتيني ، اختر من سبعة إلى 10 لتر من الذكور من أربع مراحل لكل تجربة وانقلهم إلى صفيحة NGM مصنفة ب OP 50 واتركها تنمو لمدة يوم أو يومين. إن نمو الذكور العازبين في غياب الخنثى يمنع فقدان المنوية ، وبالتالي سيتوفر عدد كبير من المنوية أثناء الإجراء التجريبي.

قبل البدء في التشريح ، قم بإعداد لتر واحد من M تسعة عازلة باستخدام ستة جرامات من فوسفات هيدروجين الصوديوم DI ، وثلاثة جرامات من فوسفات البوتاسيوم الأحادي ، وخمسة جرامات من كلوريد الصوديوم 0.25 جرام من كبريتات المغنيسيوم ، وهبدة هيدروجين لكل لتر ، وخمسة ملليلتر من وسط المنوية لتنشيط المنوية ، يتم تحضير M تسعة عازلة ووسائط المنوية من محاليل الأوتوكلاف أو الترشيح المعقمة. في يوم التشريح ، انقل الذكور العازبين إلى صفيحة NGM بدون بكتيريا واتركهم يزحفون لبضع دقائق. تساعد هذه الخطوة على إزالة الطبقة الصغيرة من الإشريكية القولونية الملتصقة على سطح الديدان.

بدلا من ذلك ، قم بعمل ماصة صغيرة من M تسعة عازلة في زجاج ساعة ونقل الذكور إلى المخزن المؤقت. بعد ذلك ، باستخدام قلم بات ، Mark A.Small دائرة على أنبوب منزلق زجاجي عند 30 إلى 50 ميكرولتر من وسط منوي واحد داخل الدائرة. تساعد الدائرة الكارهة للماء لقلم الربات على الاحتفاظ بوسط المنوية داخل الحدود.

انقل خمسة إلى 10 ذكور إلى وسط المنوية باستخدام منظار تشريح. امسك حقنة واحدة أو اثنتين حسب مستوى الراحة. مرفق بإبرة قياس 27 على كلتا يديك ، استخدم إبرة واحدة لتثبيت الدودة واستخدم الإبرة الأخرى لقطع الطرف الخلفي للذكور لتحرير SIDS.

المنوية المنبعثة على شكل حبيبات دقيقة تحت المجهر المجسم. ومع ذلك ، في بعض الأحيان قد يتم الاحتفاظ بجزء أو معظمها داخل الذبيحة. في هذه الحالة ، قد يؤدي سحب الذبيحة برفق فوق الشريحة الزجاجية إلى تسهيل إطلاق المنوية من الذبيحة.

لتصور تنشيط المنوية ، قم بتشريح الديدان في وسط منوي واحد يحتوي على P pronase E.تحت مجهر تشريح ، اترك الدودة لمدة خمس دقائق. تحتوي المنوية المنشطة على كاذب الأرجل الكاذبة. ضع زلة غطاء برفق على سطح العينة التي تم تشريحها.

أوجد مجال المنوية تحت تكبير 100 ×. المنوية لها شكل دائري. يظهر مثال على صورة DIC للحيوانات المنوية المعزولة عن أناقة الذكور C في الشكل الأول.

المنوية كروية الشكل والنوى بارزة. تظهر المنوية المنشطة في المختبر في الشكل الثاني ، المنوية لها كاذب بارز. يتم تحويل 80 إلى 95٪ من المنوية إلى منوية إذا لزم الأمر.

يمكن أن تكون الخطوة الأخيرة من الإجراء هي تحضير المنوية للتطبيقات النهائية. على سبيل المثال ، يمكن إصلاح المنوية للتألق المناعي. في النهاية ، يمكن أن تظهر النتائج التي تم الحصول عليها القدرة على تنشيط المنوية في المختبر وفحص مورفولوجيا المنوية.