الحقن التجسيمي للفيروسات من أجل تعديل جيني مستقر في نموذج الفأر

ابدأ بفأرة مخدرة بجمجمة مكشوفة في إطار تجسيم.

اخفض حامل المحقنة حتى يتماشى طرف الإبرة مع البريجما ، وهي نقطة مرجعية للجمجمة.

باستخدام الإحداثيات التجسيمية المحددة مسبقا ، حدد موقع المنطقة البطينية تحت البطينية أو

V-SVZ ، وهي مكانة عصبية تحتوي بشكل أساسي على الخلايا الجذعية العصبية أو الخلايا الجذعية العصبية ، وقم بتمييز هذه المنطقة.

قم بإزالة المحقنة وحفر حفرة صغيرة بعناية ، وتجنب تلف الدماغ.

املأ حقنة معقمة بالفيروسات التي تحمل الجينات المعدلة ووضع الإبرة على سطح الدماغ.

أعد وضع المحقنة وخفضها حتى يلامس الطرف الطبقة الداخلية لسطح الدماغ.

اخترق الدماغ للوصول إلى V-SVZ ، وحقن الفيروس ببطء ، واستمر لفترة وجيزة ، ثم اسحب المحقنة.

في V-SVZ ، يدخل الفيروس إلى الخلايا العصبية الوطنية عن طريق اندماج الغشاء. ينسخ الحمض النووي الريبي العكسي إلى الحمض النووي.

ثم يندمج هذا الحمض النووي في جينوم NSC ، مما يتيح التعديل الجيني المستقر ل NSCs.

بعد التخدير ، يحلق فأر عمره ستة إلى ثمانية أسابيع المنطقة الواقعة بين أذنيه. بعد ذلك ، قم بتطهير الجلد باستخدام اليودوفور مثل اليود بوفيدون أو 70٪ الإيثانول. ثم ضع في وضع الانبطاح على إطار تجسيم.

قم بإصلاح رأسه بعناية باستخدام قضبان الأذن ودعم الحنك للجهاز. احتفظ بالماوس على وسادة تسخين مثبتة على درجة حرارة 37 درجة مئوية وقم بتطبيق مواد تشحيم العين على عينيه.

بعد ذلك ، قم بعمل شق بطول 1 سم على فروة الرأس وسحب الجلد برفق لكشف الجمجمة. نظف سطح العظام بعناية باستخدام قضيب قطني معقم وقم بإزالة أي أنسجة متبقية. بعد ذلك ، قم بتركيب المحقنة المعقمة على الجهاز التجسيمي باستخدام حامل المحقنة. ضع الإبرة على بريجما وتأكد من أن الموضع 0 للمحور البطني الظهري يقع على سطح الجمجمة عند البريجما.

الآن ، انقل المحقنة إلى الإحداثيات المعينة x و y ، ثم على إحداثيات الوجهة x و y و z في مقياس Vernier كموقع للحقن ، وقم بتمييز العظم باستخدام قلم تحديد جراحي.

مقياس Vernier هو أداة قياس دقيقة ، مما يسمح لنا بتحديد الإحداثيات التجسيمية من bregma بدقة عالية. يشير الرقم 0 على المقياس الرئيسي إلى الوحدات ، ويحدد الرقم المحاذي للمقياس الرئيسي أعشار المليمتر.

بعد ذلك ، حرك المحقنة بعيدا عن منطقة العمل. حفر ثقب بعناية على الجمجمة دون الإضرار بالدماغ.

يجب استخدام المثقاب أفقيا على سطح الجمجمة ، ويجب إجراء مراقبة مستمرة للتقدم من أجل إيقاف الحفر بمجرد انكشاف سطح القروض. لا تتلف الدماغ الأساسي.

بعد ذلك ، قم بتحميل المحقنة بإبرة مشطوفة حادة عيار 33 مع 1 ميكرولتر من المحلول الفيروسي. ضع إبرة المحقنة بزاوية 90 درجة على سطح الدماغ. حرك المحقنة مرة أخرى إلى موقع الحقن وخفضها حتى يلامس الطرف سطح اللولب ويخترق الدماغ.

لتقليل الضرر الذي يلحق بأنسجة المخ بسبب ضغط السوائل المفرط ، حرر المعلق الفيروسي ببطء. بعد الحقن ، انتظر لمدة 5 إلى 10 دقائق لتقليل التدفق العكسي للتعليق الفيروسي قبل سحب المحقنة ببطء.