التلاعب بخلايا الصفيحة العصبية من خلال الحقن النانوي في الرحم في نموذج فأر جنيني

تأمين فأر حامل مخدر برحمها المكشوف الذي يحتوي على أجنة ما قبل العصاب. في هذه المرحلة ، تكون الصفيحة العصبية مفتوحة وتتعرض مباشرة للسائل الأمنيوسي.

ضع الأجنة المختارة على طبق بتري بغشاء مرن لتثبيتها. قم بتأمين الأجنة وتطبيق المحلول الملحي للترطيب.

قم بمحاذاة مسبار الموجات فوق الصوتية فوق الجنين وقياس قطر التجويف الأمنيوسي لحساب حجم الحقن الأمثل.

ضع إبرة حقن النانو تحتوي على محلول عدسي عالي العيار فوق الجنين المستهدف بزاوية شبه عمودية.

حقن حجم صغير دقيق في التجويف الأمنيوسي ، وسحب الإبرة برفق وإزالة مسبار الموجات فوق الصوتية.

ادفع الأجنة برفق إلى داخل الفأر.

يندمج فيروس العدسات المحقون مع خلايا الصفيحة العصبية ، ويطلق مادته الوراثية ، التي تخضع للنسخ العكسي في الحمض النووي ويتم دمجها في جينوم المضيف.

يتيح ذلك معالجة جينية مستقرة في خلايا الصفيحة العصبية ، مما يدعم التطبيقات العلاجية المحتملة.

باستخدام الملقط ، أمسك الأنسجة بين الأجنة واسحب قرني الرحم بعناية من البطن. عد وترقيم الأجنة ، إما من المبيض إلى عنق الرحم أو من عنق الرحم إلى المبيض ، على كلا الجانبين.

بعد ذلك ، باستخدام قطعة قطن مبللة ، ادفع جميع الأجنة برفق إلى تجويف البطن ، باستثناء الثلاثة الأولى التي يتم حقنها. بعد ذلك ، ضع قطرة من PBS على غشاء مرن ملتصق بالفتحة المركزية المستديرة لطبق بتري معدل متاح تجاريا واحتفظ به مباشرة فوق الأجنة. أدخل ملقطا مغلقا في شق الشريط المطاطي ، ثم حرر الملقط لفتح الشق المرن ، وإسقاط السائل على الأجنة.

باستخدام الملقط ، اسحب الجزء المقابل للأجنة الثلاثة من خلال المرونة وضعي طبق بتري برفق على بطن الفأر. باستخدام أربعة أقدام من الطين ، قم بتأمين طبق بتري وربطه فوق البطن لتقليل الضغط على الفأر ، وكذلك تقليل حساسية التصوير لتنفس الفأر ونبضات القلب. بعد ذلك ، باستخدام ملقط وقطعة قطن رطبة ، اضبط الرحم والمرونة للتأكد من أن الشريط المطاطي مغلق حول جلد الفأر ، مما يمنع تسرب PBS.

بعد ذلك ، لتثبيت الرحم ، اضغط على أسطوانة الطين النمذجة لأسفل إلى يمين الأجنة أو الرحم وأضف PBS إلى طبق بتري حتى يتم تغطية الأجنة والرحم بالكامل ب PBS. لتسهيل تسجيل الحقن ، قم بغمس مسبار الموجات فوق الصوتية في PBS واضبط الفأر أو الطاولة الجراحية بحيث يتم محاذاة الجنين الأول مع مسبار الموجات فوق الصوتية. امسح الأجنة الثلاثة وافحص التجاويف الأمنيوسية.

بعد ذلك ، باستخدام جهاز الموجات فوق الصوتية ، قم بقياس قطر التجويف الأمنيوسي لتحديد حجم الحقن المناسب. باستخدام وحدة التحكم في الحقن ، اضبط أحجام الحقن المحددة وسرعة الحقن على إبطاء ، بمعدل حقن 23 نانولتر في الثانية. بعد خفض الإبرة في PBS ، باستخدام العجلات الرئيسية في نظام السكك الحديدية ، اضغط على إفراغ على وحدة التحكم في حاقن النانو حتى يصل السائل إلى طرف الإبرة.

بعد ذلك ، ارفع الإبرة من PBS واضغط على حقن للتحقق من تفريغ قطرة من الحجم التقريبي المطلوب. اخفض الإبرة في PBS مرة أخرى وحرك الحاقن النانوي بعجلة المستوى Y على المعالج الدقيق لمحاذاة الإبرة مع مسبار الموجات فوق الصوتية والجنين. اضبط زاوية الإبرة باستخدام عجلة زاوية الحقن لضمان زاوية حقن شبه عمودية بالنسبة لجدار الرحم.

بعد ذلك ، باستخدام عجلة الحقن على المعالج الدقيق ، أدخل الإبرة في التجويف الأمنيوسي بحركة واحدة. إذا اختفى طرف الإبرة من صورة الموجات فوق الصوتية ، حرك المسبار للأمام أو للخلف لإعادة الإبرة إلى التركيز مرة أخرى. بعد ذلك ، قم بحقن الحجم المطلوب بالضغط على حقن لعدد المرات المناسب.

بعد حقن الحجم المطلوب ، انتظر لمدة 5 إلى 10 ثوان قبل سحب الإبرة بحركة واحدة لطيفة.

بعد ذلك ، ارفع مسبار الموجات فوق الصوتية والإبرة من PBS باستخدام أداة المعالجة الدقيقة ، وتحويل الإبرة بعيدا عن المشغل لتجنب التلف والإصابة.

باستخدام الملقط ، ضع الأجنين الأول والثاني مرة أخرى في البطن عن طريق دفعهما برفق عبر الشريط المطاطي.

بعد حقن جميع الأجنة ذات التجاويف السلوية المثلى ، ادفع الأجنة والرحم برفق إلى بطن الفأر.