توصيل أدوية العيون للتعديل العصبي غير الجراحي في نموذج الفأر

ابدأ بفأر معدل وراثيا تعبر الخلايا العصبية في الحصين عن مستقبلات مصمم يتم تنشيطها حصريا بواسطة الأدوية المصممة أو DREADDs.

هذه المستقبلات هندسيا تستجيب بشكل انتقائي لأدوية الاختبار الاصطناعية بينما تظل غير مستجيبة للجزيئات الذاتية.

قم

بتحريك الماوس بانتظام لتقليل التوتر والتأقلم مع الإجراء.

بعد ذلك ، قم بوزن الماوس لحساب جرعة الدواء الصحيحة.

أثناء التعامل مع الماوس ، استخدم ضوءا أحمر خافتا لمنع اضطراب الساعة البيولوجية.

قم بتحريك

الماوس برفق لشل حركته.

باستخدام ماصة ، خذ محلول دواء الاختبار وشكل قطرة عند الحافة. الآن ، اقترب من العين

وحرر القطرة على سطحها.

أعد الماوس إلى قفص منزله. كرر توصيل الدواء عدة مرات.

يمتص الدواء عن طريق العين ويدخل الدماغ.

ثم يعبر الحاجز الدموي الدماغي ويصل إلى منطقة الحصين. في وقت لاحق ، يرتبط بمستقبلات DREADD وينشط الخلايا العصبية ، مما يتيح التعديل العصبي الدقيق وغير الغازي.

لتوصيل CNO المتكرر ، بدءا من أربعة أسابيع بعد الحقن ، تأقلم مع التعامل عن طريق تجريف كل فأر ثلاث دقائق يوميا لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام قبل إعطاء قطرات العين. عندما تتأقلم الفئران مع المناولة ، قم بوزن كل فأر لتحديد الكمية المناسبة من CNO التي سيتم تسليمها لتحقيق ملليغرام واحد من CNO لكل كيلوغرام من تركيز وزن الجسم.

قبل ساعتين من إطفاء الأضواء أثناء المرحلة غير النشطة ، قم بتحميل واحد إلى ثلاثة ميكرولتر من محلول CNO المحضر في ماصة دقيقة P10 وقم بشل حركة الماوس عن طريق التجصف. قم بطرد المحلول ببطء حتى تتشكل قطرة ثابتة على طرف الماصة واجعل القطرة قريبة من القرنية بعناية حتى يتم توصيل المحلول دون لمس طرف الماصة إلى عين الماوس. ثم أعد الفأر إلى قفص منزله قبل وضع قطرة العين CNO على عين التالي.

في الحالات التي تحتاج فيها CNO إلى التسليم أثناء المرحلة النشطة للفأر ، تأكد من وجود ضوء أحمر خافت للتعامل السليم مع وتسليم CNO.