التجديد المحوري في العصب الوركي للفأر بعد إصابة السحق

ابدأ بالعصب الوركي المعزول عن الفأر.

تم نقل الخلايا العصبية داخل العصب للتعبير عن البروتينات السيتوبلازمية الفلورية.

تم سحق العصب لإحداث إصابة ، والتي تم تمييزها بخياطة.

تتدهور أجزاء المحور العصبي المصابة في الموقع ، وتقوم البلاعم المجندة بإزالة الحطام.

تتكاثر خلايا شوان لتشكل مسارات إرشادية وتفرز عوامل التغذية العصبية التي تعزز إعادة نمو المحور العصبي. تمتد المحاور على طول هذه المسارات ، وتجدد العصب.

قم بإصلاح العصب للحفاظ على الهياكل الخلوية ، ثم قم بإزالة أي أنسجة غير عصبية متصلة.

يغسل بمخزن مؤقت للتخلص من المثبتات المتبقية.

ضع العصب على شريحة مجهرية ، وقم بتطبيق وسيط تثبيت ، وضع غطاء للغطاء.

قم بتسطيح العصب لوضع المحاور داخل نفس المستوى البؤري للتصوير.

باستخدام مجهر التألق ، تتبع المحاور من موقع السحق إلى نهاياتها البعيدة لقياس

طول التجديد.

افصل DRGs مع جذور الأعصاب والعصب الوركي ، بعناية باستخدام مقص دقيق وملقط دقيق تحت مجهر التشريح.

بعد ذلك ، انقل العصب الوركي مباشرة في 4٪ PFA بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية. لتصوير وقياس المحاور الحسية المضنية تحت مجهر التشريح ، قم بتجريد الأنسجة والغشاء المرفقين على العصب الوركي الثابت باستخدام مقص دقيق وملقط دقيق بعناية. ثم اغسل العصب باستخدام PBS ثلاث مرات.

بعد ذلك ، ضع العصب الوركي على شريحة واحتفظ به مستقيما. أضف 80 ميكرولترا من المحلول المضاد للبهتان حول العصب ، ثم ضع زلة غطاء عليه. تسطيح الأنسجة المثبتة بالكامل بالضغط.

بعد ذلك ، ضع الأنسجة المسطحة تحت المجهر المقلوب ، المجهز بملحق للحصول على الفسيفساء ومعالجة الصور. عند قياس طول المحاور المتجددة ، تتبع جميع المحاور المصنفة بالفلورسنت التي يمكن تحديدها في العصب الوركي من موقع السحق إلى نهايات المحور العصبي البعيدة.