JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:40 د • August 29th, 2025
ابدأ بالعصب الوركي المعزول عن الفأر.
تم نقل الخلايا العصبية داخل العصب للتعبير عن البروتينات السيتوبلازمية الفلورية.
تم سحق العصب لإحداث إصابة ، والتي تم تمييزها بخياطة.
تتدهور أجزاء المحور العصبي المصابة في الموقع ، وتقوم البلاعم المجندة بإزالة الحطام.
تتكاثر خلايا شوان لتشكل مسارات إرشادية وتفرز عوامل التغذية العصبية التي تعزز إعادة نمو المحور العصبي. تمتد المحاور على طول هذه المسارات ، وتجدد العصب.
قم بإصلاح العصب للحفاظ على الهياكل الخلوية ، ثم قم بإزالة أي أنسجة غير عصبية متصلة.
يغسل بمخزن مؤقت للتخلص من المثبتات المتبقية.
ضع العصب على شريحة مجهرية ، وقم بتطبيق وسيط تثبيت ، وضع غطاء للغطاء.
قم بتسطيح العصب لوضع المحاور داخل نفس المستوى البؤري للتصوير.
باستخدام مجهر التألق ، تتبع المحاور من موقع السحق إلى نهاياتها البعيدة لقياس
طول التجديد.
افصل DRGs مع جذور الأعصاب والعصب الوركي ، بعناية باستخدام مقص دقيق وملقط دقيق تحت مجهر التشريح.
بعد ذلك ، انقل العصب الوركي مباشرة في 4٪ PFA بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية. لتصوير وقياس المحاور الحسية المضنية تحت مجهر التشريح ، قم بتجريد الأنسجة والغشاء المرفقين على العصب الوركي الثابت باستخدام مقص دقيق وملقط دقيق بعناية. ثم اغسل العصب باستخدام PBS ثلاث مرات.
بعد ذلك ، ضع العصب الوركي على شريحة واحتفظ به مستقيما. أضف 80 ميكرولترا من المحلول المضاد للبهتان حول العصب ، ثم ضع زلة غطاء عليه. تسطيح الأنسجة المثبتة بالكامل بالضغط.
بعد ذلك ، ضع الأنسجة المسطحة تحت المجهر المقلوب ، المجهز بملحق للحصول على الفسيفساء ومعالجة الصور. عند قياس طول المحاور المتجددة ، تتبع جميع المحاور المصنفة بالفلورسنت التي يمكن تحديدها في العصب الوركي من موقع السحق إلى نهايات المحور العصبي البعيدة.