الزرع التجسيمي لتعليق الخلايا العصبية في فأر مصاب بإصابات الدماغ الرضحية

ابدأ بحقنة محملة مسبقا متصلة بمضخة حقنة تجسيمية.

المحقنة على تعليق الخلايا العصبية المشتق من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان.

ضع الإبرة فوق قشرة الدماغ المكشوفة جراحيا للفأر المصاب بإصابات دماغية رضحية.

اخفض المحقنة للمس الجافية بطرف الإبرة ، واضبط الإحداثيات لاستهداف موقع الإصابة ، واسحب قليلا. الآن ،

قم بإنشاء شق صغير ، وإنشاء نقطة دخول للإبرة.

بعد ذلك ، قم بخفض المكبس للسماح بتدفق تعليق الخلية.

اخفض الإبرة واخترق الدماغ للوصول إلى حدود المادة الرمادية والبيضاء للقشرة العميقة.

أخيرا ، قم بنقع معلق الخلية ببطء أثناء ري موقع الجراحة بالمحلول الملحي للحفاظ على الترطيب.

عند الانتهاء ، اسحب الإبرة وأعد الري وأغلق الشق.

بمرور الوقت ، تنضج الخلايا المزروعة ، وتستعيد الدوائر العصبية ، وتصلح تلف الدماغ.

بعد حوالي 24 ساعة من استئصال التقرن ، ضع الماوس مرة أخرى في الإطار التجسيمي.

قم بتغطية الماوس بالستارة الجراحية المحسوبة. اغسل موقع الشق بمحلول ملحي معقم لتنظيف الموقع وفك الغرز. استخدم قطعة قطن مبللة بالإيثانول بنسبة 70٪ لتعقيم موقع الشق برفق واستخدم ملاقط دقيقة ومقص عيون لإزالة الغرز.

ثم قم بري موقع الجراحة واستئصال القناة بمحلول ملحي معقم وفير. في شفاط السلامة الحيوية لزراعة الخلايا ، قم بتدوير أنبوب الخلايا برفق أو النقر عليه لضمان تعليق خلية متجانس. استخدم ماصة دقيقة لتحميل ما يقرب من 7.5 ميكرولتر من الخلايا في حقنة هاميلتون من خلال طرف المكبس.

أمسك المحقنة بزاوية 120 درجة مع توجيه طرف المكبس لأسفل ، أدخل المكبس مع الحرص على عدم إدخال فقاعة هواء بين التعليق وطرف المكبس. قم بتوصيل مجموعة الحشية بإبرة الماصة وقم بتوصيل الإبرة بالمحقنة. ادفع المكبس لتحريك تعليق الخلية إلى إبرة الماصة وقم بتوصيل المحقنة بمضخة الحقنة التجسيمية.

تقدم المكبس للتأكد من أن مجموعة مضخة الحقنة تعمل بشكل صحيح وتحريك الإبرة إلى إحداثيات الحقن. قم بمحاذاة طرف الإبرة مع بريجما واضبط إحداثيات x و y على الصفر. حرك طرف الإبرة فوق استئصال الجرافة إلى ملليمترين جانبيين وناقص ملليمتر واحد خلف بريجما ولمس طرف الإبرة على سطح الأم الجافية.

ارفع الإبرة قليلا ثم قم بعمل شق صغير في الأم الجافية في الموقع الذي اتصلت فيه الإبرة. اضبط الإحداثيات التجسيمية على z يساوي صفرا وادفع المكبس للتأكد من أن تعليق الخلية يتدفق بشكل كاف قبل إدخال الإبرة في الدماغ. أدخل الإبرة في الدماغ على عمق z يساوي سالب 1.4 ملم لوضع الكسب غير المشروع عند حدود المادة الرمادية/المادة البيضاء للقشرة العميقة.

ابدأ تشغيل مضخة الحقنة لبث معلق الخلية على مدى 15 دقيقة. استخدم مجهر طويل المدى لمراقبة تدفق تعليق الخلايا المروي موقع الجراحة بمحلول ملحي معقم أثناء الحقن للحفاظ على ترطيب الأنسجة. عندما يتم تسليم جميع الخلايا ، اسحب إبرة الزرع ببطء وقم بري موقع الجراحة بمحلول ملحي إضافي قبل إغلاق الشق بخيوط جديدة.

ثم تقديم رعاية ما بعد الجراحة كما هو موضح.