عزل واستزراع بكتيريا المطثية العسيرة من أمعاء الزرد اليرقات

ابدأ بيرقة سمك الزرد التي تم القتل الرحيم مع أمعاء مصابة ب Clostridioides difficile ، وهي بكتيريا لاهوائية مسببة للأمراض.

قم بتأمين الجذع الظهري العلوي لليرقة وإزالة رأسها لفضح الأعضاء الداخلية.

قم بتأمين الجذع الظهري الأوسط وعزل الأمعاء برفق عن تجويف الجسم.

نقل الأمعاء المعزولة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق يحتوي على مخزن مؤقت.

قم بتجانس الأمعاء باستخدام مدقة لتعطيل الأنسجة وإطلاق الميكروبات المعوية.

انقل المتجانس إلى أنبوب يحتوي على وسائط تربية انتقائية مكملة بالمضادات الحيوية.

احتضان المتجانس في غرفة لاهوائية.

تمنع الظروف اللاهوائية نمو البكتيريا الهوائية ، بينما تستهدف المضادات الحيوية على وجه التحديد وتثبط نمو الميكروبات المعوية اللاهوائية الأصلية.

تقاوم المطثية العسيرة هذه المضادات الحيوية وتتكاثر في ظل ظروف لاهوائية.

تعمل العناصر الغذائية وعوامل النمو في وسط التربية على تعزيز انقسام الخلايا ، مما يتيح نمو المطثية العسيرة القابلة للحياة.

بعد القتل الرحيم ليرقات الزرد المصابة ، أدخل إبرة في الجذع الظهري ليرقات الزرد بالقرب من الرأس لشل حركة الزرد. قم بإزالة الرأس خلف الخياشيم باستخدام إبرة وخز.

أدخل إبرة ثانية في منتصف الجذع الظهري. أدخل إبرة ثالثة في بطن الزرد ، واسحب الأمعاء من تجويف الجسم. استخدم إبرة الحقن المجهري لنقل 10 إلى 15 أمعاء إلى أنبوب سعة 1.5 مليلتر يحتوي على 200 ميكرولتر من 1X