التصوير المضيء بيولوجيا لتطور ورم الثدي في نموذج أنثى الفأر

ابدأ بأنثى الفأر المحقونة بخلايا ورم الثدي التي تعبر عن اللوسيفيراز

تتكاثر الخلايا السرطانية في موقع الحقن وتتطور إلى ورم أولي.

ضع الماوس في حجرة تصوير مع تدفق مخدر لتخدير الماوس.

ثم ، حقن لوسيفيرين ، وهو ركيزة لوسيفيراز ، في الفأر المخدر.

يدور لوسيفيرين ويدخل الخلايا السرطانية ، ويتفاعل مع لوسيفيراز لإصدار تلألؤ بيولوجي.

باستخدام نظام التصوير ، التقط إشارة التلألؤ البيولوجي من الماوس.

بمرور الوقت ، يتطور الورم في الموقع الأساسي وينتقل إلى الرئتين.

احصل على صورة الماوس على فترات منتظمة وحدد مناطق الاهتمام.

بناء على شدة التلألؤ البيولوجي ، قم ببناء حركية نمو الورم لكلا الموقعين.

بمرور الوقت ، تشير الزيادة المطردة في الإشارة في موقع الورم الأساسي إلى التكاثر المستمر للورم.

ومع ذلك ، فإن الارتفاع الحاد في التلألؤ البيولوجي للرئة في نقاط زمنية لاحقة يشير إلى ورم خبيث في الخلايا السرطانية.

للبدء ، حافظ على خط الخلايا 4T1 في وسط النسر المعدل من Dulbecco أو DMEM. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية في جو مرطب يحتوي على 5 في المائة من ثاني أكسيد الكربون.

قم بنقل خط الخلايا 4T1 بجين Luc2 للتعبير عن لوسيفيراز ، وهو إنزيم مضيء بيولوجيا يتم إنتاجه بشكل أساسي. احتضان الخلايا لإبقائها جاهزة لحقن الفأر.

بعد خمس دقائق من تخدير وتحضير أنثى فأر Balb-C ، قم بحقن 2 مرة 10 إلى خمس خلايا 4T1 معبرة عن لوسيفيراز تحت الجلد في الظهر الأيسر باستخدام حقنة أنسولين سعة 1 ملليلتر. ضع لمدة 4 أسابيع بعد الحقن.

للتصوير ، ضع الفأر المخدر في وضع راقد ظهري داخل المنطقة المحددة لمعدات التصوير المضيئة بيولوجيا. حقن الفأر داخل الصفاق ب 100 ميكرولتر من محلول D-luciferin بتركيز 15 ملليغرام لكل مليلتر.

لضبط معلمات التصوير ، اضبط مرشح الانبعاث مفتوحا بدون إثارة ، والتجميع إلى 8 ، وF-Stop إلى 2 ، ونوع مجال الرؤية على D. التقط 20 صورة مضيئة بيولوجيا على مدار 20 دقيقة لكل في كل نقطة نهاية تصوير ، مما يضمن أن الصور تمثل تكاملا للإشارة لمدة 60 ثانية.

باستخدام برنامج الجهاز ، حدد مناطق محددة ذات أهمية للتمييز بين الورم الأولي وإشارات ورم خبيث في الرئة. تحديد إشارات المضيء البيولوجي في موقع الحقن وفي المنطقة الصدرية حيث يحدث ورم خبيث. احسب تطور الورم بناء على شدة الإشارة المضيئة بيولوجيا.

باستخدام الصور التي يتم جمعها أسبوعيا ، قم ببناء ملف تعريف حركية النمو لتمثيل تغيرات شدة الإشارة بمرور الوقت في كل من الورم الأولي ومواقع النقيلي. قارن اتجاهات شدة الإشارة لتحليل تطور الورم والورم الخبيث.