اختبار فلوري عالي الإنتاجية لدراسة تفاعلات الميكروبات والدودة
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:45 دقيقة • November 28th, 2025
ابدأ بأنبوب يحتوي على ديدان C. elegans .
انقل الديدان إلى صفيحة متعددة الآبار تحتوي على وسط أغروز غني بالمغذيات يحتوي إما على البكتيريا الضابطة أو البكتيريا التجريبية.
خلال الحضانة، تبتلع الديدان البكتيريا التي تستعمر ظهارة الأمعاء وتطلق الأحماض الأمينية التي تعمل كمصدر غذائي. يتم استقلاب هذه الأحماض الأمينية إلى مشتقات من الأحماض الأمينية وتخزن في حبيبات أمعاء مرتبطة بالليسوسوم.
بعد ذلك، أضف المحلول المؤقت الجديد وانقل الديدان إلى لوحة فحص متعددة الحفر السوداء.
أضف محفز إجهاد كيميائي لكل بئر وأغلق اللوحة.
ضع اللوحة في قارئ ألواح فلورية وسجل الفلورة.
في الديدان، يسبب محفز الإجهاد إجهادا تأكسديا، مما يضر خلايا الظهارة في الأمعاء.
هذا يتسبب في تمزق حبيبات الأمعاء المرتبطة بالليسوسوم، مما يطلق مشتقات الأحماض الأمينية، والتي عند تعرضها للأشعة فوق البنفسجية، تتوهج باللون الأزرق.
قارن فلورة الديدان المعرضة للمادة المضايدة واختبر البكتيريا لتقييم كفاءة استعمار البكتيريا وتأثيرها على استجابة المضيف للإجهاد التأكسدي.
اضبط تركيز الديدان إلى 15 دودة لكل ميكرولتر في أنبوب مخروطي بسعة 15 ملليتر. ثم نقل 8 ميكرولترات من محلول الدودة إلى كل من آبار صفائح أغاروز NGM ذات 96 بئر ثمانية باستخدام ماصة متعددة القنوات أو ماصة تكرارية.
بعد 36 ساعة، يتم صرف 30 ميكرولتر من M9 في كل بئر من صفيحة 96 بئرا. بعد ذلك، نقل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية