موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:45 دقيقة • March 31st, 2026
خذ ج. ديدان إليغانس التي تربى على صفائح أغار غنية بالمغذيات تحتوي على E. القولون القولونية للحالة الضابطة، وPseudomonas aeruginosa لحالة الممرض.
خلال فترة الحضانة، تتغذى الديدان على البكتيريا التي تستعمر تجويف الأمعاء.
في منطقة الضابطة، يبقى الظهارة المعوية سليمة، بينما تسبب السموم المنبعثة من الممرض ضررا في الظهارة.
اغسل الديدان بمحلول مؤقت، وانقل إلى الأطباق المدعمة بمتتبعات فلورية وبكتيريا معطلة الحرارة كمصدر غذاء.
في الديدان الضابطة، تبقى الأشعة الفلورية المبتلعة في الأمعاء، بينما في الديدان المصابة بالممرض، تعبر الظهارة التالفة وتدخل تجويف الجسم.
اغسل الديدان مرة أخرى وضعها على أطباق جديدة. ثم نقلها إلى لوحة اختبار متعددة الآبار تحتوي على مثبت للحفاظ على البنية الخلوية.
أزل المثبت. ثم أضف وسيط تثبيت للتصوير.
راقب باستخدام نظام تصوير فلوري.
زيادة الفلورة في تجويف الجسم للبروسفوردون. تشير الديدان المعرضة للهروبية إلى نفاذية معوية ناجمة عن الممرض.
غسل يرقات L4 المتزامنة مع العمر باستخدام مخزن S، وانقل حوالي 500 دودة إلى صفائح NGM التي تحتوي على بكتيريا ومواد كيميائية مختلفة. ثم حضن الصحون على درجة حرارة 20 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
جهز الأطباق المكملة ب FITC dextran عن طريق خلط 2 ملليلتر من E غير المنشط بالحرارة. قولون قولوني يحتوي على أربعة ملليغرامات من FITC-ديكسترن. أضف 100 ميكرولتر من الخليط إلى كل من 20 طبق NGM جديد من الأجار، واترك الصحون تجف لمدة ساعة على طاولة مختبر نظيفة. بعد 48 ساعة من العلاج، اغسل الديدان باستخدام S-buffer، وانقلها إلى أطباق مكملة ب FITC dextran وإلى صفائح NGM بدون FITC-dextran، وحضن الألواح طوال الليل.
في اليوم التالي، اغسل الديدان باستخدام S-buffer، ودعها تزحف في طبق الأجار الطازج NGM لمدة ساعة. أضف 50 ميكرولتر من الفورمالديهايد 4٪ إلى كل بئر من صفيحة سوداء ذات 96 بئرا مسطحة القاع، وانقل حوالي 50 دودة إلى كل بئر. بعد دقيقة إلى دقيقتين، أزل كل الفورمالديهايد، وأضف 100 ميكرولتر من وسط التثبيت في كل بئر.