Name: عزلة ذبابة الفاكهة السوداء البطن الخصيات (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 13 s
Description: تعلم عزل الخصيات من ذباب الفاكهة Drosophila melanogaster الذكور باستخدام إبر التشريح ومحلول PBS البارد. تتيح هذه الطريقة الفعالة إجراء تحاليل جزيئية متنوعة في أقل من دقيقة لكل ذبابة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

المؤلفان بالشكر Vasia الغمد لإدخال هذه التقنية في المختبر لدينا.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شريحة المجهر والزجاج مع خلفية سوداء : قص 20 ورقة بيضاء # لنفس حجم الشريحة المجهر. لون جانب واحد من الورق الأسود بحجم الشريحة باستخدام علامة دائمة (على سبيل المثال ، Sharpie). تطبيق الغراء الأبيض (إلمر) إلى الجانب الأسود والالتزام ورقة إلى الشريحة. ويمكن إعادة استخدام الشرائح. ¾ باستخدام "شريط التسمية (Fisherbrand) ، تأمين شريحة المجهر ، والجانب الزجاج ، وصولا الى منصة يطير CO 2 إلى الإصلاح في مكانه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الذباب 0-3 اليوم الذكور القديمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد دلو من الجليد ، والفوسفات مخزنة المالحة (PBS) ، والإبر تشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير 5-10 الذباب باستخدام دفق من ثاني أكسيد الكربون (2) ونقلها من الزجاجة أو القارورة إلى لوحة تطير بالقرب من شريحة المجهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة ~ 50 ميكرولتر الجليد الباردة PBS في الانخفاض في منتصف شريحة المجهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار برفق حتى ذبابة الذكور مع إبرة تشريح وتراجع إبرة تشريح في برنامج تلفزيوني ، لمسة رقيقة الجانب البطني (أي بالقرب من أجنحة) من يطير مع أنها مكان الإبرة في قطرة من برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إبرة مكان واحد في منتصف الذبابة ، وبين الصدر والبطن ، والتي أدت الى تراجع بشدة. مكان الإبرة الأخرى بين السادسة (A6) والسابعة (A7) شرائح البطن (المشارب الثاني والثالث من القاع) ؛ سحب البطن بعيدا عن الصدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ندف الخصيتين وبصرف النظر عن الأجهزة الأخرى ، وخاصة في القناة الهضمية. ولا سيما في المسوخ الأبيض ، الخصيتين والأمعاء مشابها. الاختلافات الأساسية هي أن الخصيتين تأتي دائما في أزواج ، كل خصية ولولبي ، وأكثر من اللون الأبيض في الأمعاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين الخصيتين في الجليد الباردة PBS في أنبوب microcentrifuge البولي بروبلين. </li></ol> ممثل النتائج : <img src="/files/ftp_upload/2641/2641fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الشكل 1. الظهرية رأي الجهاز التناسلي الذكري ، من flybase.org/reports/FBim0000074.html. Flybase الإسناد :... "بعد 38 A على الشكل صفحة 508 من ميلر (1950) ألف ميلر وعلم التشريح والأنسجة الداخلية لليافعة من melanogaster ذبابة الفاكهة في M. Demerec والمحرر ، وبيولوجيا ذبابة الفاكهة ، الفصل 6 ، صفحات 420 -- 534. الباردة الربيع هاربور مختبر الصحافة ، الطبعة الفاكس ، 1994. حقوق الطبع والنشر 1994 من قبل الصحافة الربيع الباردة مختبر هاربور. مستعملة بإذن نوع من مختبر كولد سبرنغ هاربور (CSHL) الصحافة. ​​انظر <a href="http://www.cshlpress.com">http://www.cshlpress.com</a> ".

<ol><li>Singh, S. R., Hou, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistological+Techniques+for+Studying+the+Drosophila+Male+Germline+Stem+Cell%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell.</a> Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

ونحن نقدم على بروتوكول لعزل الخصيتين melanogaster ذبابة الفاكهة من الكبار من الذكور. لأن هذه التقنية تتطلب تنسيق واحد اليدين ، ومهارة لا يأتي إلا مع الممارسة.

<table><tbody><tr><td>إبرة تشريح</td><td>أداة</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17346</td><td></td></tr><tr><td>شرائح مجهرية، سادة</td><td>أداة</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-553</td><td></td></tr><tr><td>إضاءة مجهر</td><td>أداة</td><td>Schott AG</td><td>KO-1500</td><td></td></tr><tr><td>وسادة CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>أداة</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-172</td><td></td></tr><tr><td>نظام Benchtop Flowbuddy المتكامل</td><td>أداة</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-122WCU</td><td></td></tr><tr><td>مرطب فقاعي</td><td>أداة</td><td>Salter Labs</td><td>7100</td><td></td></tr><tr><td>إبرة تعبئة كروية</td><td>أداة</td><td>Genesee Scientific</td><td>54-119</td><td></td></tr><tr><td>شريط ملصقات &amp;#190;&amp;#8221;</td><td>مستلزمات</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-901-5B</td><td></td></tr></tbody></table>

عزلة ذبابة الفاكهة السوداء البطن الخصيات

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

الخصيتين من melanogaster ذبابة الفاكهة توفر نموذجا هاما لدراسة صيانة الخلايا الجذعية والتمايز ، الانقسام الاختزالي ، والتفاعلات ، germline سوما. عادة ما يتم عزل الذكور البالغين من الخصيتين 0-3 أيام بعد eclosion من القضية العذراء. تتميز بسهولة الخصيتين البرية من نوع الذباب من الأنسجة الأخرى لأنهم الصفراء ، ولكن الخصيتين من الذباب الأبيض متحولة ، على خلفية مشتركة الوراثية للتجارب معملية مماثلة في كل من الشكل واللون على الوتر الطيران. أداء تشريح على شريحة ميكروسكوب زجاجية مع خلفية سوداء يجعل التعرف على الخصيتين أسهل بكثير. تتم إزالة الخصيتين من الذباب باستخدام الإبر تشريح. بالمقارنة مع البروتوكولات التي تستخدم ملقط لتشريح الخصيتين ، اسلوبنا هو أسرع بكثير ، مما يسمح للفرد يمارس جيدا لتشريح الخصيتين من الذباب البري من نوع 200-300 في الساعة ، مما أسفر عن 400-600 الخصيتين. الخصيتين من الذباب الأبيض أو من المسوخ التي تقلل من حجم الخصيتين هي أصعب لتشريح وتسفر عادة 200-400 الخصيتين للساعة الواحدة.

يمكن أن تكون ذبابة الفاكهة الخصيتين melanogaster بسرعة وبكفاءة معزولة من الذكور البالغين باستخدام الإبر تشريح. مع الممارسة ، يمكن للمرء بسهولة في عزل واحد أو يومين مبلغ الخصيتين كافية لتحليل الحمض النووي الريبي أو عن طريق التسلسل إنتاجية عالية أو أكثر من الطرق التقليدية أو البيولوجيا الجزيئية للبروتين للفحوصات الأجسام المضادة أو الانزيم المستندة.

توفر خصى ذبابة الفاكهة (Drosophila melanogaster) نموذجاً مهماً لدراسة صيانة الخلايا الجذعية وتمايزها، والانقسام الاختزالي، والتفاعل بين الخلايا الجسدية والخط الجرثومي...

الهدف العام من هذا الإجراء هو عزل الخصيتين من ذكور ذبابة Drosophila melanogaster التي يتراوح عمرها من صفر إلى ثلاثة أيام. يتم تحقيق ذلك عن طريق تخدير الذباب من الذكور وتشريح الخصيتين في قطرة من محلول PBS البارد تحت المجهر باستخدام إبرتي تشريح، مع سحب بطن الذبابة بعيداً عن صدرها.وأخيرًا، قم بفصل الخصيتين عن بقية الأنسجة واجمعهما لاستخدامهما في مجموعة متنوعة من التقنيات التحليلية مثل التألق المناعي، أو التلوين، أو عزل البروتين والرنا الكلي (total RNA). يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمرًا بالغ الأهمية لأن تحديد الخصيتين المشرحتين قد يكون من الصعب تعلمه نظرًا لصعوبة تمييزهما عن الأمعاء. ستقوم shemei ma، وهي فنية من مختبري، بتطبيق هذا الإجراء.أولاً، قم بتجهيز دلو من الثلج، وإبر تشريح، وحوالي 100 milliliters من المحلول الملحي الملحق بالفوسفات (PBS). ضع الـ PBS في دلو الثلج للتبريد. قم بإعداد شريحة مجهرية بخلفية سوداء عن طريق قص ورقة بيضاء بوزن 20 رطلاً لتناسب حجم الشريحة.ثم قم بتلوين أحد الجانبين باللون الأسود. باستخدام قلم تحديد دائم، قم بلصق الورقة في مكانها على الشريحة وتثبيت الشريحة على وسادة CO2. تحت مجهر تشريحي، قم بتخدير زجاجة تحتوي على ذباب يتراوح عمره من صفر إلى ثلاثة أيام بتيار من CO2 وأفرغها على الوسادة.بالقرب من شريحة المجهر المثبتة، حدد الذباب الذكري من خلال خطافات التزاوج الداكنة المميزة له، واستخدم الماصة لوضع حوالي 50 µL من محلول PBS المبرد بالثلج في مركز الشريحة لتكوين قطرة. التقط ذبابة ذكرية عن طريق غمس إبرة التشريح في قطرة PBS ولمس الجانب البطني للذبابة برفق، مما يؤدي إلى التصاقها بالإبرة.ضع الذبابة في قطرة من PBS، واضغط بقوة بإبرة واحدة بين صدر الذبابة وبطنها. اضغط بالإبرة الأخرى بين القطعتين السادسة والسابعة من البطن، ثم اسحب البطن بعيداً عن الصدر. افصل الخصيتين عن بقية الأعضاء، وخاصة الأمعاء التي قد تبدو مشابهة لها، للمساعدة في تمييز الخصيتين عن الأمعاء.تذكر أن الخصيتين تأتيان دائماً في أزواج، ولهما شكل حلزوني مميز، ولونهما أكثر بياضاً من أنسجة الأمعاء. يتم جمع الخصيتين في أنبوب طرد مركزي دقيق يحتوي على PBS بارد جداً بالثلج، وتُحفظ على الثلج حيث يمكن تخزينهما لعدة ساعات. وبمجرد الإتقان، يمكن تشريح ذبابة واحدة في أقل من دقيقة واحدة باتباع هذا الإجراء.يمكن تنفيذ طرق أخرى، مثل التسلسل العميق لـ RNAs الصغيرة المسكتة أو microRNAs، من أجل الإجابة على أسئلة إضافية، مثل كيف تتغير مجموعة RNAs في ذبابة طافرة معينة؟

isolation-of-drosophila-melanogaster-testes

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

يصف هذا الفيديو تشريح الغدد الملحقة من ذكور الذباب ويظهر مثالا يتم فيه فصل الغدة المعزولة إلى معلق خلية واحدة.

ذبابة الفاكهة تشريح الغدة الذكرية: طريقة لعزل الخلايا الثانوية

يصف هذا الفيديو التشريح العام للمبيض ذبابة الفاكهة ويتميز بطريقة تشريح المبايض للتصوير الحي أو الثابت.

ذبابة الفاكهة السوداء تشريح المبيض: تقنية لتحضير الأنسجة خارج الجسم الحي

يصف هذا الفيديو ذبابة الفاكهة الغدة الحلقية ، وهي بنية غدد صماء معقدة مهمة للتخليق الحيوي وإفراز الستيرويدات والهرمونات الأخرى. يوضح البروتوكول المميز تشريحه وتثبيته وتلوينته المناعية.

تشريح الغدة الحلقية لليرقات: عزل أعضاء الغدد الصماء التنموية عن ذبابة الفاكهة

العزلة مرحلة محددة من منتصف إلى أواخر بصيلات ذبابة الفاكهة مفيد لمجموعة متنوعة من الأغراض. مثل بصيلات تطوير في الثقافة، والذي يسمح للتلاعب الجيني و / أو الدوائية أن تقترن في المختبر فحوصات التنمية والتصوير الحي. بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام بصيلات للدراسات الجزيئية، مثل عزل مرنا والبروتين.

الأداة المساعدة لمرحلة محددة في منتصف إلى أواخر<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; جريب عزل

وصفت وسائل لعزل وإعداد ذبابة الفاكهة الخصيتين عينات (العيش وثابتة) للتصوير من قبل على النقيض من المرحلة ومضان المجهري في هذه الوثيقة.

تحليل الخلوي الحيوانات المنوية: الأعمال التحضيرية لايف والثابتة من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الخصية

يصف هذا البروتوكول تشريح وزراعة الخصيتين السليمتين والخراجات الجرثومية من ذبابة الفاكهة خادمة الشرانق. تسمح هذه الطريقة بالملاحظة المجهرية لتكوين المنوية خارج الجسم الحي. علاوة على ذلك ، نصف الفحص الدوائي لتأثير المثبطات على مراحل محددة من تطور الخلايا الجرثومية في الخصيتين العذراء.

فيفو السابقين الثقافة من ذبابة الفاكهة العذراء خصية واحدة ذكر الخراجات جرثومة خط: تشريح، التصوير، والمعالجة الدوائية

هنا، نقدم بروتوكولا ً لانفصال وفرز خلايا محددة من الغدد التبعية الذكور دروسوفيلا (الخلايا الثانوية) لتسلسل الحمض النووي الريبي وRT-qPCR. يتم تحقيق عزل الخلايا من خلال تنقية FACS للخلايا الثانوية التي تعبر عن GFP بعد عملية فصل متعددة الخطوات التي تتطلب تشريح، والهضم البروتياز والتشتت الميكانيكي.

بروتوكول يستند إلى FACS لعزل الحمض النووي الريبي من الخلايا الثانوية للغدد التبعي الذكور Drosophila

سلامة حاجز الدم في الدماغ أمر بالغ الأهمية لوظيفة الجهاز العصبي. في دروسوفيلا melanogaster، يتكون حاجز الدم في الدماغ من الخلايا الغليفية أثناء تكوين الجنين في وقت متأخر. يصف هذا البروتوكول طرق اختبار تكوين حاجز الدم في الدماغ وصيانته في أجنة D. melanogaster واليرقات النجمية الثالثة.

فحص لسلامة حاجز الدم في الدماغ في دروسوفيلا melanogaster

الهدف من هذا البروتوكول هو تحليل انقسام الخلايا في الأنسجة السليمة عن طريق المجهر الخلية الحية والثابتة باستخدام الحيوانات المنوية الميواتية Drosophila. يوضح البروتوكول كيفية عزل الخصيتان الكاملة والسليمة من يرقات دروسوفيلا والخوخ المبكر ، وكيفية معالجتها وتركيبها للتنظير المجهري.

إعداد دروسوفيلا رفال واختبارات Pupal لتحليل انقسام الخلايا في الأنسجة الحية والسليمة

نقدم هنا بروتوكول محسن لإعداد التركيب الكامل والتلوي المناعي لخصيات دروسوفيلا ، ومناسبة للتنظير المجهري الكونفوكوكال ، كما تسمح بوضع علامات قابلة للاستنساخ وموثوق بها. نحن نوضح هذا البروتوكول من خلال التمثيل ثلاثي الأبعاد والتحديد الكمي لتجارب الكولوكاليشن على الخلايا المنوية الكبيرة S4-S5.

الالتصنت المناعي من الخصيتين Drosophila جبل كله لتحليل Confocal 3D من الحيوانات المنوية الكبيرة

يصف البروتوكول طريقة التألق الحساس لتعدد الأشكال للنوكليوتيدات المفردة في طريقة التهجين في الموقع (SNP-FISH) لتمييز نصوص الحمض النووي الريبي الريبوسومي المشتقة من موضع الحمض النووي الريبوزومي الكروموسوم X أو Y في ذبابة الفاكهة السوداء.

كشف FISH الحساس لتعدد الأشكال أحادي النوكليوتيدات لنسخ الحمض النووي الريبي الريبوزومي الخاص بالموضع في ذبابة الفاكهة السوداء

تعلم عزل الخصيات من ذباب الفاكهة Drosophila melanogaster الذكور باستخدام إبر التشريح ومحلول PBS البارد. تتيح هذه الطريقة الفعالة إجراء تحاليل جزيئية متنوعة في أقل من دقيقة لكل ذبابة.

عزلة ذبابة الفاكهة السوداء البطن الخصيات

استكشف المزيد من الفيديوهات