المسلكة الفأرية العدوى : نموذج من الحصانة من النوع 2 والتهاب في القناة الهضمية

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذج طبيعي لعدوى الهين والحفاظ عليه. تصاب الفئران الأولى ببيض مرايا tra curus عن طريق التزقيم عن طريق الفم. بعد 21 يوما ، يتم قتل المصابة بالقتل الرحيم ويتم حصاد المساريق الدموي والغدد الليمفاوية والكريات البرازية والقولون والباحث.

باستخدام هذه العينات ، تتولد الاستجابة المناعية ضد الحيل. يمكن تحليل المرايا. يمكن تحليل عينات المصل بواسطة lysa للكشف عن الأجسام المضادة الخاصة ب TRA.

يمكن إجراء إعادة تحفيز خلايا العقدة الليمفاوية في المختبر لتحليل الاستجابات المناعية الخلوية. يمكن استخدام كريات البراز الغربية لتقييم محتوى البروتين ويمكن إجراء تحليل التعبير الجيني عن طريق تحليل QPCR للقولون. أخيرا ، يمكن استخدام طرف الأعور في علم الأنسجة بينما يمكن استخدام بقية الأعور لتحديد عبء الدودة في الفئران المصابة.

في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج توضح ما إذا كان الفأر مقاوما أو عرضة للإصابة بعدوى مذكرات التفاهم الانتقالية ويمكن توصيف الاستجابة المناعية المثبتة ضد الطفيلي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم المناعة ، مثل العوامل التي تتحكم في تنشيط الخلايا التائية المساعدة ، وكذلك البروتينات المطلوبة لتمايز الخليتين TH. يمكن نشر بيض مذكرات التفاهم في الفئران التي تعاني من نقص المناعة أو السلالات المعرضة وراثيا مثل KR بعد 35 يوما من الإصابة بحصاد البيض من الفئران التي تم قتلها.

كشف السطح البطني للحيوان واشطف بطن الفأر بالإيثانول باستخدام ملقط ومقص معقم. أمسك جلد البطن وقم بعمل شق صغير. كشف محتويات البطن ، وتحديد الأعور والقولون القريب ، ثم إزالتها.

انقل الأعضاء إلى طبق بتري بطول 10 سم يحتوي على البنسلين والستربتومايسين ، المكمل DMEM. ثم اقطع الأعور والقولون القريب مفتوحا ، وفضح التجويف والديدان باستخدام الملقط. ضع الأعضاء المفتوحة في دورق يحتوي على PBS ورجه برفق لغسل البراز.

بمجرد غسل الأعور ، انقله إلى طبق بتري طازج واستخدم ملقطا منحنيا ناعما لسحب الديدان برفق. انقل جميع الديدان من كل فأر إلى بئر واحد من ستة صفيحة تحتوي على خمسة ملليلتر من المضادات الحيوية المكملة DMEM. ضع طبق الآبار الستة بمنشفة ورقية مبللة داخل وعاء Tupperware واحتضنه على حرارة 37 درجة مئوية لمدة أربع ساعات للسماح للديدان بوضع البيض.

بعد هذا الحضانة ، استخدم الملقط لإزالة الديدان من البئر الأصلي وتقسيمها إلى بئرين جديدين يحتويان على DMEM. سيؤدي تقسيم الديدان بهذه الطريقة إلى زيادة استعادة البيض باستخدام ماصة. احصد الوسط المتبقي الذي يحتوي على مستضد وبيض مفرز من البئر الأصلي وانقله إلى أنبوب فالكون سعة 15 مل.

الطرد المركزي للأنبوب عند 3000 دورة في الدقيقة لمدة خمس دقائق. ثم قم بإزالة وحفظ supinate الذي يحتوي على مستضد أربع ساعات وثني ريس البيضة التي تحتوي على الحبيبات في ماء معقم. ضع صفيحة الآبار الستة التي تحتوي على ديدان عند 37 درجة مئوية مرة أخرى واحتضنها طوال الليل في صباح اليوم التالي.

بعد التخلص من الديدان ، احصد محتويات الآبار كما هو موضح سابقا وقم بالطرد المركزي للطافية لعزل البيض. احتفظ بالمادة الطافية التي تحتوي على مستضد طوال الليل البيض في الماء. كما كان من قبل ، امزج هذا البيض مع البيض الذي تم الحصول عليه من الحضانة لمدة أربع ساعات.

قم بتصفية البيض من خلال مصفاة 70 ميكرون لإزالة أي ديدان متبقية. ثم انقلها إلى قارورة مربعة 75 سم. قم بتغطية القارورة بورق الألمنيوم لحمايتها من الضوء وتخزين البيض لمدة ستة أسابيع في درجة حرارة الغرفة.

سيسمح ذلك للبيض بالنضوج وتجنيه بعد ستة أسابيع. اغسل البيض وحرك الماء واحسب البيض القابل للحياة. يظهر هنا.

كمثال على البويضة الجننة القابلة للحياة والبويضة غير القابلة للحياة ، ينحني ريس تركيز إكستر البالغ 50 لكل 50 ميكرولترا. في هذه المرحلة ، يمكن تخزين البيض عند أربع درجات مئوية قبل إصابة الفئران. تأكد من إعادة إرسال المحلول المحتوي على البيض جيدا.

انقل الكمية المطلوبة من اللقاح إلى أنبوب غطاء مفاجئ سعة 14 مليلتر واقلب الأنبوب للخلط. اسحب 200 ميكرولتر من البيض في إبرة تغذية بحجم مناسب لحجم مثبتة على حقنة سعة لتر واحد. قم بتقطيع الفأر وإعطاء البيض عن طريق التزقيم عن طريق الفم.

أعد الفأر المصاب إلى قفصه واترك العدوى تستمر لمدة 21 يوما. بعد 21 يوما ، استخدم حقنة غير هيبارينية لحصاد دم الفئران المصابة عن طريق ثقب القلب. بعد القتل الرحيم بثاني أكسيد الكربون ، يمكن تخزين عينات الدم عند أربع درجات مئوية.

لعزل المصل وتحليل IgGs و IgE النوعي من Eliza. كشف تجويف بطن الفأر كما هو موضح سابقا. ثم استخدم الملقط لسحب الأعور بالمقص أو أي ملقط آخر.

ادفع الأمعاء الدقيقة إلى اليمين ، مع تعريض الغدد الليمفاوية المساريقية. قم بإزالة الغدد الليمفاوية برفق مع الحرص على عدم قطع الأمعاء ووضعها في أنبوب فالكون سعة 15 مليلتر يحتوي على ملليلترين من الوسائط. يمكن لاحقا أن تكون خلايا العقدة الليمفاوية في المختبر مع مستضد S طافي لمدة أربع ساعات من مزارع الديدان لتحليل الاستجابة المناعية الخلوية للطفيلي.

بمجرد حصاد الغدد الليمفاوية, استئصال الثانية والقولون كما هو موضح سابقا, باستخدام ملقط, تحرير الكريات البرازية من القولون البعيد, وضعها في اثنين من حبيبات أنبوب الأكسجين ملليلتر يمكن تخزينها عند تحت الصفر 20 درجة مئوية وتحليلها لمحتوى البروتين بواسطة اللطخة الغربية باستخدام المقص. اقطع ما يقرب من سنتيمتر واحد من القولون القريب وضعه في أنبوب يحتوي على الحمض النووي الريبي. تخزينها لاحقا عند أربع درجات مئوية.

اقطع حوالي خمسة ملليمترات من طرف الأعور ، ممسكا بطرف الأعور بالملقط. استخدم حقنة سعة ثلاثة ملليلتر وإبرة قياس 22 لشطف العينة باستخدام PBS. ثم انقله إلى أنبوب غطاء سعة خمسة ملليلتر وغطاء يحتوي على 4٪ بارالديهايد.

يمكن تخزين عينة الأعور الثابتة من البارالديهايد عند أربع درجات مئوية واستخدامها في التحليل النسيجي. ضع باقي الأعور في طبق بتري وقم بتجميده على حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر لقتل الديدان. لتسهيل تعداد الديدان ، قم بإذابة السيكوم وضعه في طبق بتري يحتوي على حوالي خمسة ملليلتر من الماء باستخدام المقص.

اقطع السيكوم مفتوحا لكشف التجويف ورجه لجمع البراز في طبق. ضع السيكوم النظيف في طبق بتري طازج يحتوي على الماء واستخدم ملقطا منحنيا ناعما لكشط الخلايا الظهارية المعوية. انقل السيكوم إلى طبق بتري جديد يحتوي على الماء وقم بتمزيق الأنسجة إلى قطع صغيرة.

E راقب البراز والخلايا الظهارية المعوية وأنسجة الأعور تحت مجهر تشريح وتعداد الديدان وإزالتها أثناء عدها ووضعها في طبق طازج. هذه هي الطريقة التي يجب أن تبدو بها الديدان الموجودة في الأعور قبل وبعد العزلة كما هو موضح هنا. بعد عدوى مرايا الزنمة ، يمكن للستة الأسود السيطرة على الطفيليات بينما تتطور الفئران KR إلى أعباء طفيلية مرتفعة.

وبالمثل ، تطور الفئران المعرضة للإصابة A KR بشكل ملحوظ IgG محدد ب TRA ، عيار اثنين من الفئران السوداء الستة ، كما هو محدد بواسطة مصل إليزا. في هذه التجربة ، كشف تحليل اللطخة الغربية أن كمية بيتا البروتين الخاص بخلية الكأس قد زادت في براز ستة أسود ، ولكن ليس فئران KR بعد الإصابة. يظهر التحليل النسيجي للأعور البعيد تضخم خلايا الكأس وإنتاج المخاط في TRAs MOUs المقاومة التي تصيب ستة فئران سوداء ، ولكن ليس في الفئران KR المعرضة للإصابة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية نشر بيض التريسموس ، وإصابة الفئران التجريبية ، وحصاد أنسجة الأمعاء ، والميزو ، والغدد الليمفاوية المعوية ، والدم لتحليل العدوى في الفئران الحساسة أو المقاومة.