Name: الأعور إجراء ربط البزل (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: تعلم إجراء ربط البزل الأعور في الفئران C57BL/6 لدراسة الإنتان البشري. يُمكّن هذا النموذج الباحثين من استكشاف الاستجابة المناعية والأضرار العضوية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من خلال منحة من وزارة الصحة ولاية بنسلفانيا. وكان الدكتور ميغيل غارسيا توسكانو زميل ما بعد الدكتوراه في جامعة تمبل ، الذي تموله مؤسسة ألفونسو مارتن اسكوديرو خلال هذه الدراسة. نريد ان نشكر إيليا يوردانوف وKotredes كيفن لصنع شريط الفيديو.

1. الأعور ربط والبزل نموذجا فأرة للالإنتان الإنسان لهذا الإجراء C57BL / 6 تستخدم الفئران (7-9 أسابيع من العمر). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير عن طريق حقن فأر intraperitoneally حل الكيتامين 1:1 (75mg/kg) وزيلازين (15mg/kg). كمرجع ، وضخ 30 ميكرولتر من الحل في 01:01 ماوس وزنها 20 غراما. بدلا من ذلك ، يمكن أن يكون تخدير الفئران مع isoflurane استنشاق باستخدام المرذاذ مخدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق البطن من الفأر وتطهير المنطقة من قبل أول حل betadine تطبيق تليها المسح مع مسحة الكحول 70 ٪ (رقم 1 في تسلسل الصورة أدناه). ويمكن استخدام الكلورهكسيدين كمطهر البديلة. اختياري : يمكن استخدام ثنى المعقمة للحفاظ على المنطقة نظيفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت ظروف معقمة وممارسة 1-2 البطن خط الوسط الطول وفضح الأعور مع الأمعاء المجاورة (2 و 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو ligated بإحكام الأعور مع خياطة الحرير 6.0 (6-0 PROLENE ، 8680G ؛ Ethicon) عند قاعدته دون صمام اللفائفي الأعور ، ومثقوبة مرة أو مرتين بابرة عيار 19 (4 و 5) على نفس جانب من الأعور. يرجى ملاحظة أن طول الأعور ligated يعرف بأنه المسافة من نهاية القاصية من الأعور إلى نقطة ربط وتحديد درجة شدتها. مسافة&gt; 1cm تنتج الإنتان درجة عالية بينما مسافة 1 سم ≤ تنتج منتصف إلى انخفاض درجة التعفن. نلاحظ أيضا أن استخدام أسلوب ثقب الأعور هو موضح هنا يختلف عن معيار من خلال وعبر تقنية ثقب (إدخال إبرة عبر الأعور). كلا أساليب إنتاج موثوق نتائج الإنتان نفسه. ومع ذلك ، واحدة من عيوب هذه التقنية من خلال وعبر هو أنه لا يسهل التحكم في كمية البراز مقذوف عندما محشورة في الأعور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ومن ثم الأعور محشورة برفق لقذف كمية صغيرة من البراز من مواقع ثقب (6). يتم إرجاع الأعور إلى التجويف البريتوني وإغلاق الصفاق مع خيوط الحرير 6.0. (7). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الجلد مع مقاطع 7mm ريفلكس (RS - 9258 ، الآلات الجراحية Roboz) أو مقاطع الجرح ميشال (7 ملم ، RS - 9270) (8). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إحياء طريق حقن تحت الجلد الفئران 1 مل من محلول ملحي قبل تحسنت بنسبة 0.9 ٪ باستخدام إبرة 25G. وهذا التدبير الانعاش السوائل تحفز مرحلة مفرط الديناميكية الإنتان. وصفت هذه الخطوة الحاسمة في المقطع مزيد من المناقشة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياري : حقن تحت الجلد البوبرينورفين (0.05mg / كيلوغرام من وزن الجسم) أو ترامادول (20mg/kg وزن الجسم) لتسكين بعد العملية. أخذ العلم بأن هذه المواد الأفيونية يمكن منع التنفس وتنقل ، ويمكن تفسيره هذه الآثار باعتبارها علامات التسمم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توضع الحيوانات مؤقتا على وسادة التدفئة أو بدلا من ذلك على الفور وعاد الى قفص مع التعرض لمصباح الأشعة تحت الحمراء التدفئة 150W حتى يشفى من التخدير. الوقت التعافي من أكثر من 30 دقيقة إلى 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توفير حرية الوصول إلى الغذاء والماء (هيدروجيل) وضعت على الجزء السفلي من القفص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم رصد الفئران كل 12 ساعة للبقاء لمدة أسبوع أو أسبوعين أو الموت الرحيم في نقاط زمنية مختلفة لتحليل معلمات مختلفة. </li></ol> كما تحكم لتصميم تجريبي ، والحيوانات الشام اتبع أسلوب البطن دون ربط والبزل. سوف ست ساعات إلى 12 ساعة بعد العملية الجراحية الفئران تصبح السبات العميق ، وتطوير الحمى ، وانتصاب الشعر ، والإسهال ، جالسين ، والشعور بالضيق ، وكلها أعراض التسمم. يمكن أن الفئران مع التسمم الحاد جدا بالكاد تحرك قبل وفاته ويحمل الانخفاض الكبير في حرارة الجسم. وينبغي في هذه الخطوة يتم التخلص الفئران لتجنب الألم والمعاناة لفترة طويلة. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig0.jpg" alt="الشكل 0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الرقم 0"> 2. الأكثر شيوعا معلمات حلل لتقييم نتائج هذا الإجراء ، يمكن تحليل المعلمات في الأجهزة المختلفة ، ومقتطفات الخلية أو سوائل الجسم. ويمكن جمع عينات في نقاط زمنية مختلفة في الفترة من 3 ساعات لمدة أسبوع بعد إجراء العملية الجراحية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفئران البقاء على قيد الحياة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السيتوكينات وchemokines في تجويف والمصل البريتوني ومقتطفات الجهاز. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انترلوكين 6 : إنتاج ، وصدر عن حيدات ، والخلايا الجذعية ، الضامة ، وخلايا B وخلايا T ، المحببة ، والخلايا البدينة وأنواع الخلايا غيرها الكثير. انها تلعب دورا مهما في رد فعل المرحلة الحادة والالتهابات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نخر الورم عامل α : خلوى Pleiotrophic التي تلعب دورا رئيسيا في التهاب وموت الخلايا المبرمج. التي تنتجها حيدات ، الضامة ، العدلات ، والخلايا الجذعية ، والخلايا الليفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> nterleukin - 1β : إنتاج حيدات ، وخلايا NK ، والخلايا الجذعية ، والخلايا البائية والخلايا التائية. الحث الحمى الحادة وتخليق البروتين المرحلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انترلوكين 10 : يعزز امتصاص أكلة واستجابات TH2لكن العرض مستضد ويقمع TH1 ردود proinflammatory. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انترلوكين 10 : يعزز امتصاص أكلة واستجابات TH2 لكن يقمع العرض مستضد وTH1 ردود proinflammatory. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الوحيدات الكيميائي البروتين - 1 (المعروف أيضا باسم CCL2) : المجندون حيدات ، وخلايا T الذاكرة ، والخلايا الجذعية إلى مواقع الإصابة الأنسجة والعدوى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> KC (CXCL1) : إنتاج الضامة ، والخلايا البطانية. KC الماوس هو جاذب العدلة ومنشط قوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> RANTES : A الوحيدات جاذب كيميائي. يمكن أن chemoattract CD4 unstimulated + / + CD45RO الخلايا التائية الذاكرة وCD4 + وحفز الخلايا التائية CD8 + مع هاء والظواهر غير متوفر الذاكرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انترفيرون γ : يفرزها TH1 الخلايا ، الخلايا التائية السامة للخلايا ، والخلايا الجذعية ، والخلايا القاتلة الطبيعية (NK). زيادة العرض مستضد والنشاط lytic في الضامة ، ويقمع TH2 نشاط الخلايا. وتعزز التصاق ملزمة المطلوبة للهجرة الكريات البيض ويعزز نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عالية تنقل مجموعة B - 1 البروتين : وحيدات هي العامل النووي كابا بي منشط بواسطة ملزم لمستقبلات الخلوية للمنتجات مقدما نهاية glycation (الغضب) ، وتفعيل للوساطة في اطلاق سراح proinflammatory في مرحلة متأخرة من التعفن. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقرير الميلوبيروكسيديز في الهيئات كمقياس للتسلل العدلة. الميلوبيروكسيديز (MPO) هو انزيم البيروكسيديز معظم الحاضرين بكثرة في المحببة العدلة. وهو بروتين الليزوزومية المخزنة في حبيبات أليف اللازورد من العدلات. MPO له صبغة الهيم ، والذي يسبب لونه أخضر في إفرازات غنية العدلات ، مثل القيح وبعض أشكال من المخاط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل البكتيريا في مجرى الدم ، وأجهزة ، وقياس وعدد مستعمرة في الملليمتر الواحد. </li></ol> 3. ممثل النتائج في البداية تم تنفيذ الإجراء CLP في سلالة الفأر C57BL / 6. اختبرنا العديد من المعلمات لتعديل شدة الإنتان عن طريق تغيير طول وسمك ربط الإبرة كما هو موضح في الشكلين 1 و 2. من بين هذه العوامل ، وهما طول الربط يبدو أن يكون أكثر فعالية من سمك الإبرة لتغيير البقاء في المئة. كما هو مبين في الشكل (1) ، وزيادة طول الربط بأكثر من 1cm يثير زيادة في معدل الوفيات بنسبة 100 ٪ مقارنة مع الفئران من وجود ربط ≤ 1cm. زيادة سمك الإبرة انخفضت أيضا بقاء في المئة من 100 ٪ (باستخدام إبرة 22G) إلى 55 ٪ (باستخدام إبرة 19G) مع اثنين من الثقوب. اختبرنا أيضا تأثير على CLP C57BL / 6 و 129SvJ الفئران لتحديد ما إذا سلالات مختلفة الماوس حساسية مماثلة أو عرض متميز لCLP التي يسببها التسمم. الشكل 3 يوضح أنه في ظل الظروف نفسها ، وكانت الفئران 129SvJ أكثر عرضة للإصابة من C57BL / 6 ، وأشار في المئة عن طريق زيادة وفيات. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الشكل 1. تم تنفيذ ربط تأثير طول من الأعور في البقاء على قيد الحياة الحيوانية. CLP في C57BL / 6 الفئران باستخدام اثنين من أطوال مختلفة من ربط الأعور. هذا يؤثر بشكل كبير معلمة واحدة البقاء على قيد الحياة الحيوانية حيث أن جميع الحيوانات في المجموعة برصيد منطقة ربط أطول من 1 سم لقوا حتفهم في أقل من 3 أيام بالمقارنة مع مجموعة من الحيوانات وجود مجال للربط حوالي 1 سم. (ن = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig2.jpg" alt="الشكل 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 2"> الشكل 2. أنجز تأثير إبرة سمك على البقاء. CLP في C57BL / 6 الفئران باستخدام إبرة بمرتين مختلفة ، و19G 22G. وأظهرت الفئران مع الأعور مثقبة باستخدام إبرة 19G البقاء على قيد الحياة 55-60 ٪. في المقابل ، أظهرت الفئران مع الأعور مثقبة باستخدام إبرة 22G البقاء على قيد الحياة بنسبة 100 ٪ على الرغم من أنهم من ذوي الخبرة تظهر عليهم اعراض الالتهاب خلال الأيام 3-4 الأولى ، التي اختفت بعد 4 أيام (ن = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig3.jpg" alt="الشكل 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 3"> الشكل 3. المقارنة بين قابلية الإنتان سلالتين الماوس مختلفة. أنجز هذا النموذج في CLP 129SvJ وC57BL 6 / في ظل نفس الظروف. في نهاية فترة التقييم هو البقاء على قيد الحياة في المئة من سلالة 129SvJ 25 ٪ أقل مما كانت عليه في السلالة C57BL / 6 ، مما يدل على ارتفاع القابلية للالتهاب الناجم عن الإصابة متعدد المكروبات. (ن = 6).

<ol><li>Angus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+severe+sepsis+in+the+United+States%3A+analysis+of+incidence%2C+outcome%2C+and+associated+costs+of+care%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care.</a> Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).</li>
<li>Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+enigma+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The enigma of sepsis.</a> J Clin Invest. 112, 460-467 (2003).</li>
<li>Eichacker, P. Q., Gerstenberger, E. P., Banks, S. M., Cui, X., Natanson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analysis+of+acute+lung+injury+and+acute+respiratory+distress+syndrome+trials+testing+low+tidal+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Meta-analysis of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome trials testing low tidal volumes.</a> Am J Respir Crit Care Med. 166, 1510-1514 (2002).</li>
<li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis%3A+setting+the+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li>
<li>Doi, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, P. S., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis+and+sepsis-induced+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis and sepsis-induced kidney injury.</a> J Clin Invest. 119, 2868-2878 (2009).</li>
<li>Godshall, C. J., Scott, M. J., Peyton, J. C., Gardner, S. A., Cheadle, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+background+determines+susceptibility+during+murine+septic+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Genetic background determines susceptibility during murine septic peritonitis.</a> J Surg Res. 102, 45-49 (2002).</li>
<li>De Maio, A., Torres, M. B., Reeves, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+determinants+influencing+the+response+to+injury%2C+inflammation%2C+and+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Genetic determinants influencing the response to injury, inflammation, and sepsis.</a> Shock. 23, 11-17 (2005).</li>
<li>Diodato, M. D., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+the+inflammatory+response+and+survival+following+haemorrhage+and+subsequent+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Gender differences in the inflammatory response and survival following haemorrhage and subsequent sepsis.</a> Cytokine. 14, 162-169 (2001).</li>
<li>Turnbull, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+age+on+mortality+and+antibiotic+efficacy+in+cecal+ligation+and+puncture%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Effects of age on mortality and antibiotic efficacy in cecal ligation and puncture.</a> Shock. 19, 310-313 (2003).</li>
<li>Miyaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethyl+pyruvate+decreases+sepsis-induced+acute+renal+failure+and+multiple+organ+damage+in+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice.</a> Kidney Int. 64, 1620-1631 (2003).</li>
<li>Torres, M. B., De Maio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+exaggerated+inflammatory+response+after+CLP+correlates+with+a+negative+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome.</a> J Surg Res. 125, 88-93 (2005).</li>
<li>Doi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AP214%2C+an+analogue+of+alpha-melanocyte-stimulating+hormone%2C+ameliorates+sepsis-induced+acute+kidney+injury+and+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality.</a> Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).</li>
<li>Wilson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+resuscitation+attenuates+early+cytokine+mRNA+expression+after+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trauma%22%5BJournal%5D)">Fluid resuscitation attenuates early cytokine mRNA expression after peritonitis.</a> J Trauma. 41, 622-627 (1996).</li>
<li>Zanotti-Cavazzoni, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Med. 35, 748-754 (2009).</li>
<li>Hugunin, K. M., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34, 250-260 (2010).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.<br /وقد أجريت تجارب الحيوان&gt; وفقا للمعهد الوطني للصحة دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية ، والتي وافقت عليها لجنة رعاية الحيوانات واستخدامها في جامعة تمبل.

هنا نعرض بالتفصيل كيفية تنفيذ نموذج CLP في الفئران وتعدل الدرجة من الشدة. بالمقارنة مع النماذج الحيوانية الأخرى الإنتان ، ويمكن أن يؤديها في أي سلالة CLP الماوس من مختلف الأعمار والجنس. فمن السهل إجراء العمليات الجراحية وغير مكلفة نسبيا. في هذا النموذج ، ودرجة من الخطورة لديها تأثير مباشر على نسبة البقاء على قيد الحياة. طول الربط ، سمك الإبرة وعدد الثقوب والمعلمات التي يمكن السيطرة عليها لتعدل من شدة / وفيات CLP....

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> الكيتامين </td><td> Ketaset </td><td> 0856-2013-01 </td><td></td></tr><tr><td> زيلازين </td><td> AnaSed </td><td> ندى # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> حقنة الانسولين 29G </td><td> إكسل </td><td> 26028 </td><td></td></tr><tr><td> خياطة الحرير و 6-0 PROLENE </td><td> Ethicon </td><td> 8680G </td><td></td></tr><tr><td> 19G 25G والإبرة </td><td> دينار بحريني </td><td> 305186 </td><td></td></tr><tr><td> صبي </td><td> العرض العام </td><td> العرض العام </td><td></td></tr><tr><td> مصباح الأشعة تحت الحمراء التدفئة </td><td> العرض العام </td><td> العرض العام </td><td></td></tr><tr><td> الجرح ميشال مقاطع 7mm </td><td> Roboz الجراحية INSTR </td><td> RS - 9270 </td><td></td></tr><tr><td> حلقة الأذن قناع </td><td> فيشر العلمية </td><td> 19-130-4181 </td><td></td></tr><tr><td> مقص تشريح </td><td> Roboz الجراحية INSTR </td><td> RS - 6702 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine الحل </td><td> VWR </td><td> 63410-992 </td><td></td></tr><tr><td> ملقط جراحي </td><td> Roboz الجراحية INSTR </td><td> RS - 5135 </td><td></td></tr><tr><td> 70 ٪ منصة الآيزوبروبيل الكحول </td><td> فيشر العلمية </td><td> 22-031-350 </td><td></td></tr><tr><td> البوبرينورفين </td><td> بيدفورد مختبرات </td><td> 55390-100-10 </td><td></td></tr><tr><td> ترامادول </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 42965 </td><td></td></tr></tbody></table>

الأعور إجراء ربط البزل

Cecal Ligation Puncture Procedure

وتتميز الإنتان الإنسان من قبل مجموعة من ردود الفعل الشاملة في الاستجابة للعدوى المكثفة والواسعة النطاق التي فشلت في أن ترد محليا من قبل المضيف. حاليا ، الإنتان صفوف من بين الأسباب العشرة الأولى للوفيات في الولايات المتحدة الأمريكية وحدات الرعاية المركزة 1. خلال الإنتان هناك مرحلتين الديناميكية الدموية التي قد أنشأت التداخل. تعرف المرحلة الأولى (مفرط الديناميكية) وإنتاج هائلة من السيتوكينات proinflammatory وأنواع الاكسجين التفاعلية التي الضامة ، والتي تؤثر على العدلات نفاذية الأوعية الدموية (مما يؤدي إلى انخفاض ضغط الدم) ، وظيفة القلب ويؤدي الى تغييرات الأيضية وبلغت ذروتها في نخر الأنسجة وفشل الجهاز. وبالتالي فإن السبب الأكثر شيوعا للوفيات وإصابات حادة في الكلى. انخفض انتشار الخلايا اللمفاوية والخلايا وظيفة وزيادة في المرحلة الثانية (hypodynamic) هو عملية المضادة للالتهابات التي تنطوي على تغيير العرض مستضد الوحيدات. هذه الحالة تعرف باسم كبت المناعة أو الاكتئاب يزيد من المناعة بشدة لخطر العدوى nocosomial والموت في نهاية المطاف. ليست آليات عملية من هذه العمليات الفيزيولوجية المرضية تتميز أيضا. لأن كلا من مراحل الإنتان قد يسبب ضررا لا يمكن اصلاحه لا رجعة فيه وأنه لا بد من تحديد الحالة المناعية والفسيولوجية للمريض. هذا هو السبب الرئيسي وراء العديد من العقاقير العلاجية قد باءت بالفشل. قد يعطى الدواء نفسه في مراحل مختلفة من التعفن تكون علاجية أو الضارة أو غير ذلك ليس لها أي أثر 2،3 لفهم الإنتان على مختلف المستويات من المهم أن يكون النموذج الحيواني مناسب وشامل يعيد مسار السريرية لهذا المرض. من المهم أن تميز الآليات الفيزيولوجية المرضية التي تحدث أثناء الإنتان والتحكم في ظروف نموذجية لاختبار العوامل العلاجية المحتملة. لدراسة مسببات تسمم الإنسان من الباحثين قد وضعت نماذج حيوانية مختلفة. النموذج الأكثر استخداما السريرية هو ربط الأعور وثقب (CLP). طراز CLP يتكون من ثقب في الأعور السماح بالإفراج عن المواد البرازية في التجويف البريتوني لتوليد استجابة مناعية تتفاقم الناجم عن الإصابة متعدد المكروبات. هذا النموذج يستوفي الشرط البشري الذي هو ذات الصلة سريريا. كما هو الحال في البشر والفئران التي تتعرض CLP مع الانعاش السوائل تظهر الأول (المبكر) المرحلة مفرط الديناميكية التي تقدم في الوقت المناسب للمرحلة (الراحل) الثاني hypodynamic. بالإضافة إلى ذلك ، ملف خلوى مشابهة لتلك التي شوهدت في الإنتان البشرية حيث هناك زيادة في الخلايا اللمفاوية (4،5 في استعراض). يرجع ذلك إلى آليات متعددة ومتداخلة المشاركة في التعفن ، يحتاج الباحثون نموذجا لشدة الإنتان مناسبة للرقابة من أجل الحصول على نتائج متسقة وقابلة للتكرار.

الفأر نموذج من ربط الأعور وثقب باعتبارها أداة قيمة لدراسة الإنتان الإنسان.

تتميز الإنتان البشري بمجموعة من التفاعلات الجهازية استجابةً لعدوى مكثفة وهائلة فشل الجسم في احتوائها محلياً بواسطة...

مرحباً، اسمي ميغيل توسكانو من مختبر الدكتورة دينا في قسم الميكروبيولوجيا وعلم الدم بجامعة تيمبل. سنقوم اليوم بشرح كيفية إعداد نموذج الإصابة بـ iCal والثقب في سلالة فئران C 57 Black Seas. نستخدم هذا النموذج في مختبرنا لمحاكاة تعفن الدم البشري.يتكون هذا النموذج بشكل أساسي من ثقب في السيروم يسمح بإطلاق المواد البرازية في التجويف البريتوني لإحداث إنتان متعدد الميكروبات، مما يؤدي إلى توليد استجابة مناعية مفرطة. وفي هذا النموذج، تتعرض العديد من الأعضاء وأنواع الخلايا المختلفة لتلف غير قابل للإصلاح، وهو ما قد يؤدي في النهاية إلى موت الحيوان.لنبدأ الآن. تخدير الفأر. تتمثل الخطوة الأولى في تخدير الحيوان عن طريق الحقن داخل الصفاق.مزيج بنسبة واحد إلى واحد من Ketomine و xylazine. لتجنب التعرض للعض من قبل الفأر، ولتجنب إيذائه، يجب الإمساك بالفأر من الذيل بيد واحدة، بينما يتم الضغط بظهره مقابل الأرض باليد الأخرى.بعد ذلك، يمكننا إمساك الفأر من مؤخرة الرأس ثم قلبه على ظهره لكشف منطقة البطن. وباستخدام حقنة إنسولين بمقاس 29 gauge، نحقن 20 إلى 30 µL من المخدر في التجويف البريتوني. ولتجهيز الفأر للإجراء، يتم إمساك مؤخرة الفأر وحلاقة بطنه عن طريق الضغط على الذيل و/أو ساق الفأر.نتحقق من عدم حساسية الفأر للألم، ثم يتم تعقيم البطن؛ أولاً بالفرك بمحلول Betadine، يليه المسح بمسحة كحول أيزوبروبيلي لمدة دقيقة واحدة على الأقل. إجراء عملية فتح البطن: لإجراء عملية فتح البطن، نرفع الجلد في منتصف البطن باستخدام الملقط ونقوم بعمل شق صغير بطول سنتيمتر واحد تقريباً.بعد ذلك، ارفع منطقة العجان وقم بإجراء شق صغير آخر للكشف عن التجويف البريتوني. وباستخدام ملقط منحني، أمسك بالغشاء البريتوني. ثم حدد موقع الأعور وقم بإبرازه عن طريق تمريره عبر الغشاء البريتوني.ضعه فوق منطقة البطن. والآن تأتي لحظة الربط. ويعد هذا عاملاً مهماً.من أجل تحديد شدة النموذج، يمكننا تعديل شدة الإجراء المتبع. فمن خلال تمديد الربط، ستصاب الفئران بتسمم دموي أخف حدة؛ فإذا تم الربط بالقرب من نهاية الأعور، يكون التسمم الدموي متوسط الدرجة، أما إذا تم في المنتصف فيكون التسمم الدموي متوسط الشدة، وإذا تم بالقرب من الصمام اللفائفي الأعوري يكون التسمم الدموي شديداً، وستنعكس شدة الإجراء في نسبة الوفيات.لا تقم أبداً بربط الصمام اللفائفي الأعوري. الآن قم بإجراء الربط باستخدام خيط جراحي حريري مع عقدة مزدوجة لضمان إحكام الربط، ثم قم بإجراء الثقب؛ أمسك بالأعور وقم بعمل ثقب بعناية بالقرب من موقع الربط، ثم قم بعمل ثقب آخر بالقرب من نهاية الأعور. إن غشاء الأعور رقيق وسيتم ثقبه بسهولة تامة.يمكننا أيضاً تعديل شدة النموذج باستخدام إبر ذات سماكات مختلفة وإجراء ثقب واحد أو ثقبين. وتعتبر طريقة الثقب المفرد أو المزدوج الموضحة هنا تقنية بديلة لطريقة الثقب المتسلسل النافذ التقليدية. وتكمن ميزة استخدام طريقة الثقب المفرد أو المزدوج في إمكانية التحكم بشكل أفضل في كمية البراز التي يتم إخراجها عند الضغط على الأعور.أمسك الأعور بكلتا الإصبعين وادفعه برفق لاستخراج كمية صغيرة جداً من البراز. بعد إغلاق فتحة البطن، ارفع البريتون ثم أعد وضع الأعور بعناية داخل التجويف البريتوني.يجب توخي الحذر الشديد لتجنب ثقب الأعور عن طريق الخطأ أثناء استخدام الملاقط، ويوصى باستخدام ملاقط أكبر حجماً. والآن حان الوقت لإغلاق التجويف الصفاقي. باستخدام خيط جراحي حريري، من المهم جداً التأكد من إغلاقه بإحكام شديد.نبدأ من أحد جانبي الجرح حيث نقوم بعمل عقدة. نستمر في إجراء الغرز حتى نصل إلى الجانب الآخر عن طريق تمرير خيط الحرير أسفل عروة الثقب السابق. ولإغلاق الجلد، يمكننا استخدام مشابك ميتشل للجروح أو المشابك الانعكاسية باستخدام الأداة المناسبة لإغلاق هذه المشابك.ضع عددًا كافيًا من المشابك لضمان إغلاق الجرح. قم بإنعاش الفئران عن طريق حقن 1 mL من محلول ملحي دافئ مسبقًا تحت الجلد. باستخدام إبرة قياس 25 gauge، سيؤدي إجراء إنعاش السوائل هذا إلى تحفيز المرحلة مفرطة الديناميكية من تعفن الدم، وبذلك تنتهي العملية.ضع الفأر تحت مصباح تدفئة بالأشعة تحت الحمراء، أو بدلاً من ذلك فوق وسادة تدفئة، حتى يفيق الفأر من التخدير. وفر الطعام والماء على أرضية القفص وراقب الحيوانات كل ثماني إلى 12 ساعة لرصد أي علامات مرضية. احقن buprenorphine تحت الجلد لتسكين الآلام بعد الجراحة.من المسكنات البديلة التي يمكن استخدامها عقار T.Tramadol. وتتمثل علامات الإنتان وأعراضه في الحمى، والخمول، وتقشعر الجلد (pelo)، والانتصاب، والإسهال، والتجمع، والوعكة الصحية. وتظهر الحيوانات شديدة المرض انخفاضاً حاداً في درجة حرارة الجسم وبالكاد تتحرك لتجنب المعاناة.يجب إجراء القتل الرحيم لها في هذه المرحلة. وبذلك نكون قد انتهينا من كيفية تنفيذ ربط الشريان والنموذج الثقبي. نأمل أن تكونوا قد استمتعتم بعرض هذا الإجراء ووجدتموه مفيداً جداً لأبحاثكم قبل البدء في دراستكم الحيوانية. نوصيكم بشدة باستخدام عقول قديمة أو غير مستخدمة للتدريب من أجل تحديد درجة الشدة المناسبة لتجاربكم، وذلك عن طريق تعديل طول الرباط، وسُمك الإبرة، وعدد الثقوب.وبناءً على ذلك، وداعاً.

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

نحن تصف أسلوب الرواية القسطرة الجراحية ل'حلقات المعوية" ضمن الدقاق من الأغنام. مرة واحدة الحيوانات قد تعافى من الجراحة والمضادات الحيوية ومسحت المسكنات ، ويمكن ان تودع مباشرة في معالجات متعددة الحلقات عن طريق القسطرة.

قسطرة من حلقات المعوية في المجترات

سي الختم هو استنزاف biofragmentable حماية تدبيس مفاغرة القولون والمستقيم. في هذا الفيديو ، وترد تفاصيل نشر القوات ، والتصنيع والاستخدام.

سي الختم : استنزاف Biofragmentable حماية القولون من التحام مدبس التسرب

القولون الصاعد ستينت الصفاق (CASP) هو نموذج موحد للغاية لالإنتان البطن متعدد المكروبات في القوارض. توضح هذه المقالة إجراء العمليات الجراحية في CASP. نموذج CASP ومشتقاته تسمح التحقيق المنهجي لمختلف المشاكل المتعلقة بموضوع التسمم.

القولون الصاعد ستينت الصفاق (CASP) -- نموذج موحد لالإنتان البطن متعدد المكروبات

يمكن أن يتسبب الإنتان التجريبية في الفئران باستخدام ربط الأعور وثقب (CLP) الأسلوب. يتم عرض البروتوكولات الحالية لتقييم الالتهام الذاتي في الجسم الحي في سياق الإنتان CLP التي يسببها هنا: بروتوكول لقياس الالتهام الذاتي باستخدام الفئران (GFP) LC3، وبروتوكول لقياس تشكيل جسيم بلعمي ذاتي بواسطة المجهر الإلكتروني.

الأعور ربط والبزل التي يسببها تعفن الدم نموذجا لدراسة الالتهام الذاتي في الفئران

نقدم إجراء جراحيا لقسطرة الجذع الليمفاوي المعوي في الخنازير حديثي الولادة لجمع كميات كبيرة من مكونات التمثيل الغذائي للدهون من الليمفاوية الصادرة.

طويلة الأجل قسطرة للالمعوية الليمفاوية الجذع وجمع الليمفاوية في الأطفال حديثي الولادة الخنازير

يصف هذا البروتوكول نموذج فأر قسطرة مركزي للأمراض الخطيرة لفترات طويلة. نحن نجمع بين طريقة ربط الرأس والثقب للحث على الإنتان مع استخدام خط وريدي مركزي للسوائل والأدوية وإعطاء المغذيات لتقليد البيئة السريرية البشرية.

استخدام خط وريدي المركزي للسوائل والمخدرات وإدارة المغذيات في نموذج الفأر من الأمراض الخطيرة

وصول المواد الغذائية، والايضات الحجمية والأدوية بالتداول يسيطر عليه حاجز الدم القناة الهضمية في (جب). يصف لنا طريقة مباشرة لقياس جب النفاذية في فيفو، الذي، على النقيض من الأساليب غير المباشرة المستخدمة عادة، هو تقريبا لا تتأثر وظائف الكبد والكلى.

أسلوب في فيفو لتقييم حاجز القناة الهضمية-الدم والايض الكبد من منتجات الحجمية

يصف هذا البروتوكول تقنيات لقياس النتائج المعدية الكامنة وراء العدوى الثانوية المكتسبة من المستشفيات في حالة كبت المناعة، أولاً عن طريق إنشاء ربط/ثقب الفئران بعد ذلك تحديها بعدوى داخل الأنف إلى إنشاء نموذج ذات صلة سريريا من الإنتان كبت المناعة.

تصميم ربط الدقّة النسّية والثقب والعدوى داخل الأنف نموذج مزدوج للكبت المناعي الناجم عن الإنتان

Dysregulated وظيفة الحاجز الظهاري المعوي والاستجابات المناعية هي السمات المميزة لمرض التهاب الأمعاء التي لا تزال سيئة التحقيق بسبب عدم وجود نماذج فسيولوجية. هنا، ونحن نصف نموذج حلقة الماوس المعوية التي توظف قطاع الأمعاء الأوعية الدموية جيدا والخارجي لدراسة نفاذية المخاطية والتوظيف الكريات البيض في الجسم الحي.

التقييم الوظيفي نفاذية الأمعاء والهجرة العدلية عبر الإبط في الفئران باستخدام نموذج حلقة معوية موحدة

يقدم هذا البروتوكول التفاصيل التشغيلية لربط وثقب cecal (CLP) في نموذج فأر من الإنتان. CLP هي واحدة من أكثر التقنيات المستخدمة على نطاق واسع لإنشاء نموذج حيواني للإنتان. لذلك ، يلزم وجود بروتوكول CLP موحد لتحقيق نتائج بحثية موثوقة.

تقييم علامة حيوية موثوقة في نموذج فأر للإنتان الناجم عن الربط وثقب

تعلم إجراء ربط البزل الأعور في الفئران C57BL/6 لدراسة الإنتان البشري. يُمكّن هذا النموذج الباحثين من استكشاف الاستجابة المناعية والأضرار العضوية.

الأعور إجراء ربط البزل

استكشف المزيد من الفيديوهات