May 7th, 2011
الفأر نموذج من ربط الأعور وثقب باعتبارها أداة قيمة لدراسة الإنتان الإنسان.
مرحبا ، اسمي ميغيل توسكانو من مختبر الدكتور دينا في قسم علم الأحياء الدقيقة وعلم الدم في جامعة تمبل. سنوضح لك اليوم كيفية إعداد نموذج الادعاء والثقب iCal في سلالة C 57 Black Seas Mouse . نستخدم هذا النموذج في مختبرنا لتقليد الإنتان البشري.
في الأساس ، يتكون هذا النموذج من ثقب في المصل يسمح بإطلاق مادة البراز في التجويف البريتوني لإنتاج تعفن الدم متعدد الميكروبات ، وبالتالي توليد استجابة مناعية متفاقمة في هذا النموذج ، تتلف العديد من الأعضاء وأنواع الخلايا المختلفة بشكل لا رجعة فيه. هذا في النهاية يمكن أن يسبب موت.
لذلك دعونا نبدأ. تخدير الفأر. الخطوة الأولى هي تخدير عن طريق حقن داخل الصفاق.
خليط واحد إلى واحد من الكيتومين والزيلازين. لتجنب التعرض للعض من قبل الماوس ، لتجنب إيذائه ، يجب أن نمسك بالفأر من الذيل بيد واحدة. من ناحية أخرى ، نضغط على الأرض.
ثم يمكننا الاستيلاء على الفأر من مؤخرة الرأس ثم قلب على ظهره لفضح البطن. باستخدام حقنة الأنسولين قياس 29 ، نقوم بحقن 20 إلى 30 ميكرولتر من التخدير في التجويف البريتوني. تحضير الماوس للإجراء ، أمسك الجزء الخلفي من الماوس وحلق بطنه بالضغط على الذيل أو ساق الماوس.
نتحقق من أن الفأر غير حساس للألم ، ثم يتم تطهير البطن. أولا عن طريق الفرك بمحلول البيتادين ، متبوعا بالمسح بمناديل كحول الأيزوبروبيل لمدة دقيقة واحدة على الأقل. ممارسة شق البطن لممارسة شق البطن ، نرفع الجلد في منتصف البطن بالملقط ونعمل شقا صغيرا يبلغ طوله حوالي سنتيمتر واحد.
ثم ارفع العجان ومارس شقا صغيرا آخر لفضح التجويف البريتوني. باستخدام ملقط منحني ، أمسك الغشاء البريتوني. تحديد وكشف الأعور عن طريق تمريره عبر الغشاء البريتوني.
ضعه على البطن. الآن هي لحظة الربط. هذا عامل مهم.
من أجل تحديد شدة النموذج ، يمكننا تعديل شدة الإجراء. من خلال تمديد الربط ، ستصاب الفئران بتعفن الدم الأكثر اعتدالا. إذا تم الربط بالقرب من نهاية الأعور ، والإنتان متوسط الدرجة إذا تم إجراؤه في المنتصف والإنتان الشديد إذا تم إجراؤه بالقرب من الصمام اللفائفي ، فستنعكس شدة الإجراء بنسبة الوفيات.
لا تربط الصمام اللفائفي أبدا. الآن قم بعمل الربط باستخدام خياطة حريرية بعقدة مزدوجة لجعلها مشدودة ، مما يجعل الثقب أمسك الأعور وقم بعمل ثقب بعناية بالقرب من موقع الربط وقم بعمل ثقب آخر أقرب إلى نهاية الأعور. غشاء السيكوم ناعم وسيتم ثقبه بسهولة بالغة.
باستخدام الإبر بسماكات مختلفة وعمل ثقوب أو ثقبين ، يمكننا أيضا تعديل شدة النموذج. طريقة الثقب الفردي أو المزدوج الموضحة هنا هي تقنية بديلة للثقب الكلاسيكي من خلال ومن خلال البزل التكملي. تتمثل ميزة استخدام طريقة الثقب الفردي أو المزدوج في أنه يمكن للمرء التحكم بشكل أفضل في كمية البراز المبثوقة عندما يبحثون عن ضغطها.
أمسك العور بكلتا أصابعه وبثق الأعور برفق لاستخراج كمية صغيرة جدا من البراز. إغلاق شق البطن ، ثم ارفع الصفاق ووضع الأعور بعناية مرة أخرى. في التجويف البريتوني.
كن حذرا للغاية لتجنب الوخز العرضي للأعصور باستخدام الملقط ، يوصى باستخدام ملقط أكبر. حان الوقت الآن لإغلاق التجويف البريتوني. باستخدام خياطة الحرير ، من المهم جدا التأكد من إغلاقها جيدا.
نبدأ من جانب واحد من الجرح حيث نصنع عقدة. استمر في عمل الخيط حتى الجانب الآخر عن طريق تمرير الحرير تحت حلقة الثقب السابق. لإغلاق الجلد ، يمكننا استخدام مشابك الجرح ميتشل أو مقاطع الانعكاسية باستخدام الأداة المناسبة لإغلاق المقاطع.
ضع أكبر عدد ممكن من المشابك حسب الحاجة للتأكد من إغلاق الجرح. إنعاش الفئران عن طريق حقن تحت الجلد ، مليلتر واحد من محلول ملحي دافئ. باستخدام إبرة قياس 25 ، سيؤدي إجراء إنعاش السوائل هذا إلى مرحلة الديناميكية المفرطة من الإنتان ، وإنهاء الإجراء.
ضع الماوس تحت ضوء تسخين بالأشعة تحت الحمراء ، أو بدلا من ذلك فوق وسادة تدفئة حتى يتعافى الماوس من التخدير. توفير الطعام والماء على أرضية القفص والإشراف على كل ثماني إلى 12 ساعة بحثا عن علامات المرض. حقن البوبرينورفين تحت الجلد لتسكين الألم بعد الجراحة.
مسكن مختلف للاستخدام هو T.Tramadol. علامات الإنتان وأعراض الإنتان هي الحمى والخمول والبيلو والانتصاب والإسهال والتجمع والتوعك. تظهر المريضة جدا انخفاضا حادا في درجة حرارة الجسم وبالكاد تتحرك لتجنب المعاناة.
يجب القتل الرحيم في هذه المرحلة H.So هذه هي الطريقة التي نؤدي بها الربط المنجلي والنموذج المحدد. نأمل أن تكون قد استمتعت بعرض هذا الإجراء ووجدته مفيدا جدا لبحثك قبل البدء في دراسة. نوصي بشدة باستخدام العقول القديمة أو غير المستخدمة للتدريب من أجل تحديد درجة الشدة المناسبة لتجاربك عن طريق تعديل طول الربط وسمك الإبرة وعدد الثقوب.
مع ذلك ، وداعا.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
تناقش هذه المقالة نموذج الفأر لربط وثقّب الأعور، الذي يُستخدم لدراسة الإنتان البشري. يقوم النموذج بمحاكاة الإنتان متعدد الميكروبات عن طريق إدخال مادة برازية في التجويف البريتوني، مما يؤدي إلى استجابة مناعية مبالغ فيها وتلف محتمل في الأعضاء.
The cecal ligation and puncture (CLP) model provides a reproducible, polymicrobial sepsis model that mirrors human pathophysiology, enabling target validation and mechanistic de-risking in early discovery. By reproducing both hyperdynamic and hypodynamic phases, it supports predictive confidence in therapeutic screening and translational biomarker identification. This model aids in assessing drug efficacy across disease stages, reducing late-stage failure risk in sepsis-related programs.
The CLP model fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, particularly for immunomodulatory agents.