موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:53 دقيقة • April 30th, 2023
أولا ، لتحضير الحبيبات ، قم بحقن السيليكون اللاصق الطبي في أحد طرفي قطعة من أنابيب السيليكون المقطوعة مسبقا. بعد ذلك ، قم بتعبئة مسحوق ثنائي هيدروتستوستيرون أو DHT بإحكام داخل الأنبوب. ثم استخدم السيليكون اللاصق الطبي لإغلاق الطرف الآخر من الأنبوب. يجب أن تحتوي الكريات على كميات متساوية من السيليكون في كل طرف بدون فقاعات. ضع الكريات في محلول ملحي قبل إدخالها في أنثى الفأر.
على الفأر المخدر ، استخدم قطعة قطن مع مطهر لتنظيف المنطقة الجراحية المحلوقة. قم بعمل شق صغير عبر الجلد بالقرب من الرقبة. استخدم المغزل لعمل نفق تحت الجلد في اتجاه أنف الفأر. أدخل الحبيبات في النفق. أخيرا ، أغلق الشق بمادة لاصقة جراحية. سوف تطلق الحبيبات جرعة ثابتة من DHT ويتم استبدالها كل 4 أسابيع لضمان التعرض لفترات طويلة للدواء.
لإعداد ثنائي هيدروتستوسترون أو DHT بيليه, استخدام شفرة الحلاقة لقطع قطعة 15 ملم من أنابيب السيليكون واستخدام حقنة 3 ملليلتر مجهزة بإبرة ضعيفة 20 قياس لحقن 2 إلى 5 ملليمترات سيليكون لاصق طبي في أحد طرفي الأنبوب. اترك الأنبوب يجف طوال الليل وتحقق من وجود فقاعات هواء في الطرف المغلق.
ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة ، صب مسحوق DHT في قارب وزن بلاستيكي في غطاء تدفق. قم بإعجاب الطرف المفتوح للأنبوب المغطى بالمواد اللاصقة في المسحوق. باستخدام مشبك ورق كبير مستقيم ، قم بدك المسحوق لأسفل في الأنبوب حتى يصل DHT إلى العمق التجريبي المناسب. ثم أغلق الجانب المفتوح من الأنبوب بالسيليكون طوال الليل.
في صباح اليوم التالي ، قم بقص كل جانب مغلق للحصول على طول 2 ملم من السيليكون على جانبي DHT ولا توجد كريات تحكم في DHT. ثم, قم بتخزين الكريات في أنبوب مخروطي سعة 50 مل ملفوف بورق الألمنيوم في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى 3 أشهر.
لتوليد طراز الماوس متلازمة تكيس المبايض ، قم بموازنة ما يصل إلى 20 DHT أو تحكم في الكريات في أنابيب مخروطية منفصلة سعة 50 مليلتر تحتوي على 30 مل من محلول ملحي بنسبة 0.9٪ لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية. في اليوم التالي ، تأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم في فأر مخدر يبلغ من العمر شهرين واستخدم شاشا معقما لإدارة بوفيدون اليود المتسلسل و 70٪ من دعك الإيثانول في منطقة الجراحة.
بعد ذلك ، قم بعمل شق 5 ملم عبر الجلد بالقرب من الرقبة واستخدم غزل بوزن 10 لعمل نفق 15 ملم في الاتجاه المنقاري. استخدم المحصن لإدخال حبيبات ظهريا في النفق وإغلاق الشق بالمادة اللاصقة الجراحية. قم بتقريب حواف الجرح يدويا باستخدام ملقط واستخدم ضربات تنظيف لطيفة لتطبيق 3 طبقات رقيقة من المادة اللاصقة السائلة على بعد 1 سم من كل جانب من حواف الجرح المحددة.
ثم, ضع الماوس وحده في قفص على وسادة حرارية مع المراقبة حتى الاستلقاء الكامل, استبدال الحبيبات كل 4 أسابيع للحفاظ على مستوى ثابت من التعرض الاندروجين.