عزل الميتوكوندريا: تقنية لعزل الميتوكوندريا من عينة أنسجة سرطان المبيض البشري
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:09 دقيقة • April 30th, 2023
الميتوكوندريا ، العضيات السيتوبلازمية المعروفة باسم قوى الخلية ، لتغييرات هيكلية ووظيفية جذرية أثناء تطور السرطان.
لعزل الميتوكوندريا ، خذ أنسجة سرطانية نظيفة في طبق زجاجي وفرمها إلى قطع صغيرة. انقل القطع إلى أنبوب يحتوي على عازلة عزل الميتوكوندريا. تجانس العينة لتعطيل الخلايا وإطلاق محتوياتها ، بما في ذلك العضيات.
الطرد المركزي الخليط بسرعة منخفضة. هذا يكوير المكونات الأكثر كثافة مثل النوى وبقايا الأنسجة وأي خلايا سليمة ، تاركا مكونات أقل كثافة مثل الميتوكوندريا والميكروسومات والبيروكسيسومات والليزوسومات في المادة الطافية. اجمع المادة الطافية وأجهزة الطرد المركزي بسرعة عالية. تبقى الميكروسومات ، كونها أخف نسبيا ، في المادة الطافية ، بينما يدور الجزء الخام المحتوي على الميتوكوندريا في الأسفل.
قم بإزالة المادة الطافية وإعادة تعليق الحبيبات في وسط تدرج الكثافة المناسب. قم بإعداد تدرج كثافة متقطع عن طريق وضع طبقات من جزء الميتوكوندريا الخام داخل وسائط كثافة مختلفة ، وترتيبها بترتيب تناقص الكثافة من الأسفل إلى الأعلى. جهاز طرد مركزي بسرعة عالية جدا. تنفصل العضيات داخل الأنبوب لتبني وضع توازن بناء على كثافتها النسبية. اجمع جزء الميتوكوندريا المتكون في الواجهة بين وسائط الكثافة ، والتي تحتوي على البيروكسيسومات والليزوزومات.
لبدء هذا الإجراء ، قم بإعداد 250 مل من المخزن المؤقت لعزل ا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية