نظام الثقافة القريبة: تقنية زراعة في المختبر لدراسة إشارات الباراكرين بين الخلايا

في إشارات paracrine ، تنتج الخلايا وتفرز جزيئات الإشارات التي تحفز استجابات في الخلايا المجاورة. لتقليد إشارات paracrine ، ابدأ بإعداد معلقات أحادية الخلية لخلايا سرطان المبيض وخلايا الظهارة المتوسطة في وسطها المناسب.

بعد ذلك ، خذ إدخالا غشائيا مساميا مقلوبة في طبق ثقافة معقم. قم بتعليق الخلية السرطانية على السطح السفلي لغشاء الإدخال لتشكيل قبة سائلة. احتضان للسماح للخلايا بالاستقرار والالتصاق بالغشاء.

اقلب الملحق لتصريف الوسائط. انقل الملحق إلى طبق مزرعة طازج يحتوي على وسائط نمو لتغذية الخلايا السرطانية الملتصقة بالسطح السفلي للغشاء. الآن ، أضف تعليق الخلية المتوسطة إلى بئر الإدراج. احتضان للسماح للخلايا بالالتصاق بالجانب الآخر من الغشاء ، مما يحرم أي اتصال مباشر بين نوعي الخلايا.

أثناء الاستزراع ، يفرز كلا النوعين من الخلايا عوامل إشارة. تنتشر هذه الجزيئات عبر الغشاء المسامي باتجاه الخلايا المجاورة. ترتبط بمستقبلات خلايا معينة وتحفز شلالات إشارات معقدة في كلا النوعين من الخلايا.

ابدأ بفصل خلايا سرطان المبيض من خليط ملتقى بنسبة 80٪ مع 1 مليلتر من 0.25٪ تريبسين لمدة 40 إلى 60 ثانية ، متبوعا بتحييد التفاعل ب 6 ملليلتر من وسط النمو الكامل. اجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي وأعد تعليق الحبيبات في 5 ملليلتر من وسط النمو الكامل الطازج.

بعد العد ، قم بتخفيف الخلايا إلى 100,000 خلية سرطان المبيض لكل مليلتر من تركيز متوسط النمو الكامل ، ووضع ثلاث إدخالات مقلوبة مقلوبة 0.4 ميكرومتر من غشاء البولي كربونات المعالجة بزراعة الأنسجة المسام لكل حالة تجريبية في طبق زراعة أنسجة معقمة بحجم مناسب. قم بتسمية الإدخالات وفقا للحالة التجريبية ، وقم بوضع الخلايا السرطانية بعناية في الجزء السفلي من كل ملحق في دوائر متحدة المركز ، بدءا من منتصف الغشاء والانتقال إلى الخارج ، لتشكيل قبة 800 ميكرولتر.

كن حذرا للغاية عند زرع الخلايا على السطح السفلي للملحق حتى لا تنفد قبة الخلايا المحتوية على الوسط من حواف الملحق أثناء الحضانة.

عندما يتم زرع جميع الإدخالات ، قم بتغطية الطبق وضع الإدخالات بعناية في حاضنة زراعة الخلايا. بعد حوالي 4 ساعات ، افصل HPMC ب 2 ملليلتر من 0.25٪ تربسين لمدة دقيقة إلى دقيقتين ، متبوعا بتحييد التفاعل ب 12 مل من وسط النمو الكامل.

اجمع HPMC عن طريق الطرد المركزي وأعد تعليق الحبيبات في 10 ملليلتر من وسط النمو الكامل للعد. قم بتخفيف الخلايا إلى 300,000 HPMC لكل مليلتر من وسط النمو الكامل وأضف 2.5 مل من وسط النمو الكامل الطازج إلى كل بئر من صفيحة استزراع 6 آبار.

باستخدام ملقط معقم ، ضع كل جانب من الإدخال على الجانب الأيمن لأعلى في كل بئر من الصفيحة المكونة من 6 آبار بحيث يتم غمر الأسطح المتصلة بخلايا سرطان المبيض السفلية في الوسائط. بعد ذلك ، قم بزرع 1.5 مل من HPMC في بئر كل ملحق وضع اللوحة في حاضنة زراعة الخلايا لمدة 72 ساعة.

• Paracrine Signaling - Cellular communication through secreted molecules affecting neighboring cells.
• Mesothelial Surface - The membrane where the mesothelial cells adhere and function.
• Culture System - Set-up where cells are grown under controlled conditions, often in vitro.
• Corning 10-013-CV - Specific type of culture dish used for cell adhesion and growth experiments.
• In Vitro Cell Culture Techniques - Methods used to cultivate cells in controlled environments outside of the living organism.

• Introduce Paracrine Signaling – Paracrine signaling is the process by which cells communicate and influence the behavior of neighboring cells via secreted molecules (e.g., paracrine).
• Key Concepts - We can simulate this biological process in an in vitro cell culture system using human mesothelial cells and cancer cells (e.g., culture system).
• Underlying Mechanisms - Both cell types secret signaling factors which bind to receptors and trigger complex responses (e.g., mesothelial surface).
• Connect to Experiment - To study this, cells are cultivated on either side of a porous membrane in a culture dish (e.g., corning 10-013-CV).

• What is paracrine signaling and how does it work in an in vitro culture system?
• How are mesothelial and cancer cells cultured for this study?
• What are the key concepts and mechanisms underlying paracrine signaling?

• Practical Applications - Understanding paracrine signaling could improve diagnosis and treatment of diseases like cancer (e.g., in vitro cell culture techniques).
• Industry Impact - The knowledge acquired is beneficial for the medical and pharmaceutical sectors (e.g., culture system).
• Societal Importance - The broader implications extend to improving patient outcomes and quality of care (e.g., mesothelial surface).
• Link to Scientific Advancements - The use of in vitro cultivation techniques continues to advance our understanding of cell communication (e.g., corning 10-013-CV).