نمذجة ورم خبيث لسرطان المبيض في بطانة التجويف البريتوني: طريقة لإنشاء نموذج ثلاثي الأبعاد في المختبر للبطانة البريتونية

يشكل

الصفاق ، أو الغشاء الذي يبطن تجويف البطن ، خلايا الظهارة المتوسطة البريتونية مدعومة فوق طبقة من النسيج الضام الوعائي الليفي. تلتصق خلايا سرطان المبيض المنتشرة بهذه البطانة البريتونية وتتكاثر في أورام سرطانية.

لنمذجة ورم خبيث لسرطان المبيض ، ابدأ بأخذ الخلايا الليفية البشرية في أنبوب مخروطي الشكل واخلطها مع الكولاجين - بروتين مصفوفة خارج الخلية. ضع التعليق على طبق ثقافة. احتضان لتسهيل تصلب مصفوفة الكولاجين لتضمين الخلايا الليفية وتقليد النسيج الضام للصفاق.

بعد ذلك ، أضف تعليقا من خلايا الظهارة المتوسطة فوق طبقة الخلايا الليفية والكولاجين. احتضان اللوحة للسماح للخلايا المتوسطة بالالتصاق وتشكيل طبقة أحادية على سطح طبقة الخلايا الليفية والكولاجين. تحاكي هذه الثقافة العضوية ثلاثية الأبعاد الآن تكوين وهندسة البطانة البريتونية في الجسم الحي.

أخيرا ، قم بزرع هذه الثقافة العضوية بخلايا سرطان المبيض واحتضانها للمدة المطلوبة. تطلق خلايا سرطان المبيض جزيئات إشارات معينة تغير طبقة الظهارة المتوسطة ، مما يعزز التصاق الخلايا السرطانية وغزوها ، وتحاكي الظروف النقيلية في الجسم الحي.

لتحرير الخلايا الليفية العادية من الثرب من المزرعة ، اشطف قارورة الثقافة ب 10 ملليلتر من PBS متبوعا ب 3 ملليلتر من التربسين لمدة لا تزيد عن 5 دقائق. عندما تنفصل الخلايا ، قم بتحييد التربسين بما لا يقل عن ثلاثة أضعاف حجم وسط النمو الكامل وانقل الخلايا إلى أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلترا. قم بتدوير الخلايا وإعادة تعليق الحبيبات في 5 ملليلتر من وسط النمو الكامل. بعد ذلك ، عد الخلايا وقم بتخفيفها إلى 2 إلى 4 مرات 10 إلى الخلايا الليفية الثالثة لكل 100 ميكرولتر من تركيز وسط النمو الكامل.

بعد ذلك ، أضف 0.5 ميكروغرام لكل 100 ميكرولتر من الكولاجين الأول ذيل الفئران إلى الخلايا وقم بوضع 100 ميكرولتر من الخلايا لكل بئر في صفيحة سوداء وشفافة ذات 96 بئر. بعد ذلك ، انقل اللوحة إلى حاضنة زراعة الخلايا لمدة 4 ساعات على الأقل أو حتى تلتصق الخلايا بسطح اللوحة. أثناء استقرار الخلايا الليفية العادية للثرب ، افصل HPMC عن قوارير الاستزراع الخاصة بها وقم بتخفيف هذه الخلايا إلى 1 إلى 2 مرات 10 إلى HPMC الرابع لكل 50 ميكرولترا من وسط النمو الكامل.

بعد ذلك ، أضف 50 ميكرولترا من HPMC لكل بئر إلى الخلايا الليفية العادية المرفقة بالثرب وأعد اللوحة إلى حاضنة زراعة الخلايا لمدة 18 ساعة على الأقل قبل الاستخدام التجريبي. في اليوم التالي ، قم بزرع الثقافات العضوية المشتركة ثلاثية الأبعاد مع GFP التي تعبر عن خلايا سرطان المبيض من 80٪ إلى 90٪ من ثقافة التقاء عند التخفيف المناسب لمقايسة المصب المطلوبة.