عزل الخلايا الظهارية المتوسطة: تقنية لعزل الخلايا الظهارية المتوسطة الأولية من عينة أنسجة الثرب البشري

تبطن الخلايا المتوسطة الأولية البشرية ، أو HPMCs ، العديد من الأعضاء الحشوية مثل الثرب أو طبقة الأنسجة الدهنية الموجودة في التجويف البريتوني.

لعزل الخلايا الظهارية المتوسطة ، ابدأ بغمر عينة من الثرب البشري في مخزن مؤقت مناسب لإزالة خلايا الدم الحمراء الزائدة أو كرات الدم الحمراء. بعد ذلك ، ضع الثرب في طبق زجاجي وافرمه إلى قطع. يؤدي هذا إلى فصل الأنسجة ، وإطلاق HPMCs جنبا إلى جنب مع كرات الدم الحمراء الملوثة.

انقل القطع إلى أنبوب مخروطي واتركها تظل ثابتة للوقت المطلوب. ترتفع الأنسجة المفرومة الغنية بالدهون منخفضة الكثافة إلى الأعلى ، بينما تستقر المكونات الخلوية الكثيفة في الأسفل. بعد ذلك ، قم بشفط السائل الموجود في الأسفل ، الذي يحتوي على HPMCs و RBCs ، في أنبوب جديد.

جهاز طرد مركزي لجمع الخلايا. قم بإزالة المادة الطافية المحتوية على المخزن المؤقت. أعد تعليق الحبيبات في وسط نمو الظهارة المتوسطة واحتضانها للمدة المطلوبة. تسهل الوسائط النمو الانتقائي ل HPMCs على كرات الدم الحمراء.

راقب الخلايا باستخدام مجهر ضوئي لتأكيد نمو خلايا الظهارة المتوسطة البشرية على شكل مكعب.

عند الحصول على عينة جراحية من الثرب البشري ، اغمر العينة على الفور في PBS بدرجة حرارة الغرفة. في غضون ساعتين من الغمر ، انقل الثرب إلى أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر يحتوي على 20 مل من PBS الطازج. انقل غسول PBS المتبقي الذي