عزل الخلايا الظهارية المتوسطة: تقنية لعزل الخلايا الظهارية المتوسطة الأولية من عينة أنسجة الثرب البشري

0 views • 4:36 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تبطن الخلايا المتوسطة الأولية البشرية ، أو HPMCs ، العديد من الأعضاء الحشوية مثل الثرب أو طبقة الأنسجة الدهنية الموجودة في التجويف البريتوني.

لعزل الخلايا الظهارية المتوسطة ، ابدأ بغمر عينة من الثرب البشري في مخزن مؤقت مناسب لإزالة خلايا الدم الحمراء الزائدة أو كرات الدم الحمراء. بعد ذلك ، ضع الثرب في طبق زجاجي وافرمه إلى قطع. يؤدي هذا إلى فصل الأنسجة ، وإطلاق HPMCs جنبا إلى جنب مع كرات الدم الحمراء الملوثة.

انقل القطع إلى أنبوب مخروطي واتركها تظل ثابتة للوقت المطلوب. ترتفع الأنسجة المفرومة الغنية بالدهون منخفضة الكثافة إلى الأعلى ، بينما تستقر المكونات الخلوية الكثيفة في الأسفل. بعد ذلك ، قم بشفط السائل الموجود في الأسفل ، الذي يحتوي على HPMCs و RBCs ، في أنبوب جديد.

جهاز طرد مركزي لجمع الخلايا. قم بإزالة المادة الطافية المحتوية على المخزن المؤقت. أعد تعليق الحبيبات في وسط نمو الظهارة المتوسطة واحتضانها للمدة المطلوبة. تسهل الوسائط النمو الانتقائي ل HPMCs على كرات الدم الحمراء.

راقب الخلايا باستخدام مجهر ضوئي لتأكيد نمو خلايا الظهارة المتوسطة البشرية على شكل مكعب.

عند الحصول على عينة جراحية من الثرب البشري ، اغمر العينة على الفور في PBS بدرجة حرارة الغرفة. في غضون ساعتين من الغمر ، انقل الثرب إلى أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر يحتوي على 20 مل من PBS الطازج. انقل غسول PBS المتبقي الذي يحتوي على خلايا الظهارة المتوسطة البشرية الأولية أو HPMC وخلايا الدم الحمراء إلى أنبوب مخروطي جديد سعة 50 مليلتر وقم بتدوير الخلايا.

بعد ذلك ، اسكب محتويات الأنبوب في طبق ثقافة معقم بطول 10 سم واستخدم مشرطين لفرم الأنسجة إلى قطع 5 مليمترات مكعبة. لعزل الخلايا الظهارية المتوسطة البشرية الأولية أو HPMC ، انقل قطع الثرب إلى أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر وانتظر دقيقة واحدة حتى تطفو القطع الصلبة إلى الأعلى. سوف يستقر HPMC في الجزء السفلي من الأنبوب مع خلايا الدم الحمراء.

استخدم ماصة لنقل غسول PBS الذي يحتوي على خلايا الظهارة المتوسطة وخلايا الدم الحمراء إلى الأنبوب الذي يحتوي على الخلايا المحببة وتدور الخلايا. بعد ذلك ، أضف 20 مل من PBS الطازج إلى الثرب واجمع HPMC و RBC المحتويين على PBS ثلاث مرات أخرى كما هو موضح للتو للخلايا المحببة الأصلية.

بعد الدوران النهائي ، قم بوضع الخلايا في قارورة مساحتها 75 سم مربع في 15 مل من وسط النمو الكامل. لعزل HPMC إضافي من عينة الثرب ، رج الأنسجة الصلبة المتبقية في 20 مل من PBS عند 200 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية. بعد 10 دقائق ، اترك العينة ترتاح لمدة دقيقة واحدة للسماح للأنسجة الصلبة بالارتفاع إلى أعلى الأنبوب.

بعد ذلك ، اجمع HPMC و RBC من قاع الأنبوب كما هو موضح للتو. الآن ، قم بتدوير الخلايا من الغسيل الثانوي ووضعها في قارورة منفصلة مساحتها 75 سم مربع في 15 مل من وسط النمو الكامل. لعزل أي HPMC متبقي ، رج الأنسجة لمدة 10 دقائق أخرى هذه المرة في مزيج من PBS و 10 ملليلتر من التربسين-EDTA ، وقم بوضع HPMC و RBC في قارورة مساحتها 75 سم مربع.

بعد ذلك ، احتضان المزارع عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون في بيئة رطبة. تغذية الخلايا المطلية ب 15 مل من وسط النمو الكامل الطازج في اليومين 3 و 5 دون إزالة الوسط المستهلك. يمكن التعرف على HPMC من خلال شكلها المكعب وتعبيرها عن السيتوكيراتين -8 والفيمنتين.

08:49

نموذج 3D أورجانوتيبيك الميلانوما جلد كروي

Related Videos

0 Views

05:05

توليد نموذج سرطان الثدي المنتشر مورين أورثوتوبيك والقيام باستئصال الثدي الجذري مورين

Related Videos

0 Views

06:28

عزل وثقافة الخلايا التحمية الناضجة البشرية باستخدام الثقافات الكلية للأغشية الناضجة (MAAC)

Related Videos

0 Views

08:54

في الفحص المختبري التخليص الظهارية النماذج أن الخطوات في وقت مبكر من الإنبثاث سرطان المبيض

Related Videos

0 Views

05:09

عزل الميتوكوندريا: تقنية لعزل الميتوكوندريا من عينة أنسجة سرطان المبيض البشري

Related Videos

0 Views

03:18

نمذجة استعمار الخلايا السرطانية للمبيض للثرب: طريقة خارج الجسم الحي لإنشاء استعمار البقع اللبنية لخلايا سرطان المبيض المسماة بالفلورسنت في مستخلصات ثرب الفئران

Related Videos

0 Views

04:17

تقنية لعزل الخلايا البدينة الأولية من تجويف الفئران البريتوني

Related Videos

0 Views

06:59

عزل Myofibroblasts الابتدائية من ماوس والأنسجة البشرية القولون

Related Videos

0 Views

05:58

طريقة الحصول على خلايا سرطان المبيض الابتدائية من العينات الصلبة

Related Videos

0 Views

09:00

نمذجة خطوات المبكر عن سرطان المبيض نشر في الثقافة عضوي النمط من البريتوني تجويف الإنسان

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026