موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:20 دقيقة • April 30th, 2023
التجويف البريتوني هو المسافة بين جدار البطن وبطانة الأعضاء الداخلية. بالنسبة للحقن داخل الصفاق ، ابدأ بتقييد الفأر الحي من منطقة رقبته بحيث يميل رأس الفأر إلى أسفل مع كشف بطنه البطني.
تقييد الفأر يقيد حركته ويحول أعضاء البطن نحو الحجاب الحاجز ، مما يمنع التلف العرضي للأعضاء أثناء إدخال الإبرة.
بجوار خط الوسط عبر بطن الفأر ، في الربع الأيمن السفلي ، حدد نقطة لإدخال الإبرة. يمنع هذا الموقع خطر ثقب الستر.
بعد ذلك ، خذ حقنة تحتوي على معلق خلية واحدة لخلايا سرطان المبيض. أدخل الإبرة عند النقطة المختارة على عمق نصف سنتيمتر تقريبا لاختراق جدار البطن الخارجي فقط. أخيرا ، قم بحقن تعليق الخلية السرطانية ببطء. هذا يضمن التوزيع الفعال للخلايا داخل التجويف البريتوني.
أعد الفأر إلى قفصه وراقبه بحثا عن نمو الورم. قد تطلق الأنسجة الموجودة داخل التجويف البريتوني جزيئات كيميائية محددة تجذب الخلايا السرطانية مما يؤدي إلى هجرتها واستعمارها ، مما يساهم في النهاية في تطور الورم.
قم بتحميل 500 ميكرولتر من نظام التعليق أحادي الخلية الموسوم بالفلورسنت في المحقنة. بعد ذلك ، ضع المحقنة في إبرة معقمة مقاس 25 لتقليل قص الخلايا قبل الحقن. قم بتقييد الماوس باليد الأخرى ، والتقط الماوس من قفص الرقبة وامسك الذيل باستخدام راحة اليد والسبابة. ثم قم بإصلاح الساق الخلفية اليسرى بين الخاتم والإصبع الصغير. لتجنب صدمة أعضاء البطن ، كبح جماح الفأر جيدا حتى لا يتحرك أثناء الحقن.
تخيل خطا عبر البطن ، وحدد نقطة على الجانب الأيمن للحيوان وبالقرب من خط الوسط. نقطة الدخول هي قحفية ووسطية قليلا من الحلمة الأخيرة. استعد لإدخال الإبرة على الجانب الأيمن من الفأر لتجنب الأعور وتقليل خطر ثقب الأمعاء. أدخل الإبرة في المنطقة الجانبية السفلية من بطن الفأر على عمق 0.5 سم تقريبا. اسحب المكبس للخلف للتأكد من أن الإبرة لم تخترق الأوعية الدموية أو الأعضاء البريتونية الأخرى.
إذا لم يتم شفط أي سائل ، فقم بحقن العينة باستخدام ضغط ثابت بطيء. ثم اسحب الإبرة وأعد الماوس إلى قفصه. لا تقم بتجميع المحقنة قبل التخلص منها في حاوية الأدوات الحادة.