موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:18 دقيقة • April 30th, 2023
يتكون الثرب ، وهو نسيج غني بالدهون داخل التجويف البريتوني ، من مستودعات دهنية توفر بيئة مكروية مناسبة للخلايا السرطانية النقيلية لاستعمار وتشكيل أورام ثانوية. لدراسة هذا الاستعمار خارج الجسم الحي ، ابدأ بوضع إدراج ثقافة الخلايا الغشائية القابلة للاختراق داخل لوحة المزرعة.
ضع مادة لاصقة للأنسجة على المنطقة الداخلية من غشاء الإدخال. ضع نبتة الفأر الأذالية على المادة اللاصقة لشل حركة الأنسجة. قم بزرع معلق من خلايا سرطان المبيض ذات العلامات الفلورية برفق فوق الثرب
بعد ذلك ، املأ جوانب البئر بوسيط مناسب لتكملة نمو الخلايا واحتضانها للوقت المطلوب. يحتوي النسيج العقلي على هياكل متخصصة تسمى البقع اللبنية ، وهي مجموعات من الخلايا المناعية معبأة حول شبكات الأوعية الدموية. تفرز هذه الخلايا المناعية بعض العوامل الكيميائية التي تجذب الخلايا السرطانية وتعزز زرعها. تتكاثر الخلايا السرطانية المستعمرة ، وتحاكي الحالات النقيلية.
أخيرا ، تجاهل الوسائط المستهلكة. راقب المزرعة باستخدام المجهر الفلوري لتقييم مستعمرات الخلايا السرطانية الفلورية داخل الأنسجة العقلية.
قم بتنمية وإعداد الخلايا الموسومة بالفلورسنت وإعادة تعليقها بتركيز 2 مليون خلية لكل مليلتر. ضع ما يقرب من 6 ميكرولترات من لاصق الأنسجة على غشاء ملحق المزرعة واتركه يجف في الهواء. بعد ذلك ، اغسل الغشاء مرتين بالماء المعقم لإزالة أي مادة لاصقة زائدة قبل تجفيف الأغشية بالهواء تحت غطاء رقائقي.
قم باستئصال الأومينتا بعناية وإرفاقها بالغشاء المطلي بالمادة اللاصقة باستخدام ملقط معقم. بعد السماح للأنسجة بالالتصاق بالغشاء لمدة دقيقة واحدة ، أضف 500 ميكرولتر من تعليق الخلية فوق كل شرب في كل إدراج مزرعة.
بعد ذلك ، املأ المنطقة المحيطة بغرفة الترانسويل ب 2.5 مل من وسائط DME / F-12. احتضان الأومنتا مع تعليق الخلية لمدة ست ساعات عند 37 درجة مئوية في بيئة CO2 بنسبة 5٪. قم بإزالة وغسل الأومنتا بعناية بحوالي 10 مل من PBS. أخيرا ، تصور بؤر الخلايا السرطانية الفلورية باستخدام نظام تصوير الفلورسنت المناسب.