JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 4:34 د • April 30th, 2023
أثناء ورم خبيث لسرطان المبيض ، تنفصل الخلايا الخبيثة عن موقع الورم الأساسي وتبدأ في الدوران داخل التجويف البريتوني. يمكن لهذه الخلايا بعد ذلك تكوين مجموعات أو كرويات تلتصق بطبقة أحادية الخلية المتوسطة المبطنة للتجويف البريتوني. مع نمو الورم ، فإنه يزيل الخلايا الظهارية المتوسطة الأساسية لتسهيل الغزو.
لنمذجة إزالة الظهارة المتوسطة ، ابدأ ببذر الخلايا المتوسطة التي تعبر عن البروتين الفلوري الأخضر أو GFP في طبق ثقافة زجاجي مطلي بالفبرونكتين. يوفر طلاء الفيبرونيكتين مصفوفة تعزز ارتباط الخلايا. احتضان الطبق للسماح للخلايا المتوسطة بالانتشار وتشكيل طبقة أحادية.
بعد ذلك ، انقل معلق من كرويات خلايا سرطان المبيض التي تعبر عن بروتين الفلورسنت الأحمر إلى الطبقة الأحادية الظهارية المتوسطة. قم بتصوير الثقافة لفترة طويلة باستخدام الفحص المجهري الفلوري بفاصل زمني. سوف تستقر الكرات الفلورية الحمراء وتلتصق بالطبقة الأحادية الظهارية المتوسطة الفلورية الخضراء.
تمارس الخلايا السرطانية قوة على خلايا الظهارة المتوسطة ، مما يعطل تقاطعات الخلايا ويغير سلامة طبقة الظهارة المتوسطة. تعمل القوة أيضا على إزاحة الخلايا الظهارية المتوسطة الأساسية ، مما يؤدي إلى حدوث ثقب. اختر إعداد مرشح GFP مناسب لتصور الثقب الناتج كمساحة سوداء في الصورة. قم بقياس المساحة لتحديد مدى إزالة الظهارة الظهارية.
لبدء هذا الإجراء ، قم بتغطية آبار طبق MatTek ذو القاع الزجاجي المكون من 6 آبار بالألياف الفيبرونكتينية. أضف 2 مل من محلول الفيبرونكتين / PBS إلى كل بئر من الطبق واحتضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. يتم زراعة الخلايا المتوسطة التي تعبر عن البروتين الفلوري الأخضر ، لتشكيل طبقة أحادية للخلية المتوسطة ، في وسط أساسي بنسبة 10٪. قم بتربسين صفيحة من الخلايا المتوسطة وتدور في جهاز طرد مركزي منضدي بسرعة 900 دورة في الدقيقة لمدة ثلاث دقائق.
استنشاق المادة الطافية وإعادة تعليق الخلايا في وسط أساسي بنسبة 10٪. اضبط التركيز المطلوب مع 10٪ وسط أساسي. عند اكتمال حضانة الفبرونيكتين لمدة 30 دقيقة لطبق MatTek ، اغسل الآبار ب 2 مل من PBS. استنشق PBS واللوحة 6 مرات 10 إلى الخلايا المتوسطة الخامسة لكل بئر في كل بئر من طبق MatTek المكون من 6 آبار. احتضن طبق MatTek في حاضنة زراعة الخلايا بدرجة حرارة 37 درجة مئوية طوال الليل للسماح لخلايا الظهارة المتوسطة بالالتصاق بالطبق وتشكيل طبقة أحادية.
استخدم ماصة لجمع الكرويات لسرطان المبيض من الصفيحة المطلية ب 96 بئرا بولي هيما. استنشق الوسط من بئر واحد من طبق MatTek المكون من 6 آبار والذي يحتوي على طبقة أحادية الخلية الظهارية. يغسل مرة واحدة مع 2 مل من PBS. أضف كل الكرويات من الطبق المكون من 96 بئرا إلى بئر واحد من طبق MatTek. هذا ما يقرب من ثلاثة أضعاف عدد الكرويات التي سيتم تصويرها لحساب هبوط الكرويات على جزء من الطبق لا يمكن تصويره.
نظرا لأننا نريد تصوير كروي واحد فقط لكل مجال رؤية ، يجب تجنب تجميع الكرويات. هز الطبق برفق من جانب إلى آخر لتوزيع الكرويات بالتساوي عبر الطبقة الأحادية قبل أن تلتصق.
ضع طبق MatTek على مسرح مجهر مضان واسع المجال مقلوب قادر على إجراء تصوير بفاصل زمني لمدة ثماني ساعات على الأقل. استخدم مرحلة آلية لتصوير مواضع متعددة في الطبق ، مع أحداث إقحام كروية متعددة ، في تجربة واحدة. سوف تستقر كرويات خلايا سرطان المبيض في قاع الطبق وتلتصق بطبقة أحادية الخلية المتوسطة الظهارية. اجمع صور GFP و RFP و Phase ل 20 تفاعلا كرويا / أحادي الطبقة كل عشر دقائق لمدة ثماني ساعات.
تبحث هذه الدراسة في التفاعل بين الكريات السرطانية للمبيض والخلايا المبطنة للبريتون أثناء عملية الانتقال الورمي. وتتضمن المنهجية تصوير هذه التفاعلات لفهم آليات التصفية الميزوثيلية.
يعالج التقييم الكمي لغزو الكريات السرطانية المبيضية للطبقات الأحادية من الخلايا الميزوثيلية خطوة مبكرة وحرجة في التطور النقيلي، مما يساهم بشكل مباشر في التحقق من الأهداف العلمية والحد من المخاطر الميكانيكية في مسارات تطوير أدوية الأورام. يتيح هذا المقايسة قياساً عالي المحتوى وقابلاً للتكرار للتفاعلات بين الخلايا ذات الصلة بالانتشار النقيلي، مما يعزز الثقة التنبؤية عند نقطة التحول من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة قبل السريرية. كما أن دمج مخرجات التصوير الكمي يقوي عملية فرز وتحديد أولويات المحفظة العلاجية للاستراتيجيات العلاجية المضادة للنقائل.
يأتي اختبار التصفية الميزوثيليومية هذا ضمن التسلسل الممتد من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة قبل السريرية، مما يتيح اختبار الفرضيات، والتحقق من صحة الأهداف، والفحص المبكر للمركبات المثبطة للنقائل السرطانية.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026