فحص إزالة الظهارة المتوسطة: تقنية في المختبر لتحديد قدرة غزو الكرويات الكروية لسرطان المبيض في طبقات أحادية الخلايا الظهارية المتوسطة

0 مشاهدات4:34 د • April 30th, 2023

أثناء ورم خبيث لسرطان المبيض ، تنفصل الخلايا الخبيثة عن موقع الورم الأساسي وتبدأ في الدوران داخل التجويف البريتوني. يمكن لهذه الخلايا بعد ذلك تكوين مجموعات أو كرويات تلتصق بطبقة أحادية الخلية المتوسطة المبطنة للتجويف البريتوني. مع نمو الورم ، فإنه يزيل الخلايا الظهارية المتوسطة الأساسية لتسهيل الغزو.

لنمذجة إزالة الظهارة المتوسطة ، ابدأ ببذر الخلايا المتوسطة التي تعبر عن البروتين الفلوري الأخضر أو GFP في طبق ثقافة زجاجي مطلي بالفبرونكتين. يوفر طلاء الفيبرونيكتين مصفوفة تعزز ارتباط الخلايا. احتضان الطبق للسماح للخلايا المتوسطة بالانتشار وتشكيل طبقة أحادية.

بعد ذلك ، انقل معلق من كرويات خلايا سرطان المبيض التي تعبر عن بروتين الفلورسنت الأحمر إلى الطبقة الأحادية الظهارية المتوسطة. قم بتصوير الثقافة لفترة طويلة باستخدام الفحص المجهري الفلوري بفاصل زمني. سوف تستقر الكرات الفلورية الحمراء وتلتصق بالطبقة الأحادية الظهارية المتوسطة الفلورية الخضراء.

تمارس الخلايا السرطانية قوة على خلايا الظهارة المتوسطة ، مما يعطل تقاطعات الخلايا ويغير سلامة طبقة الظهارة المتوسطة. تعمل القوة أيضا على إزاحة الخلايا الظهارية المتوسطة الأساسية ، مما يؤدي إلى حدوث ثقب. اختر إعداد مرشح GFP مناسب لتصور الثقب الناتج كمساحة سوداء في الصورة. قم بقياس المساحة لتحديد مدى إزالة الظهارة الظهارية.

لبدء هذا الإجراء ، قم بتغطية آبار طبق MatTek ذو القاع الزجاجي المكون من 6 آبار بالألياف الفيبرونكتينية. أضف 2 مل من محلول الفيبرونكتين / PBS إلى كل بئر من الطبق واحتضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. يتم زراعة الخلايا المتوسطة التي تعبر عن البروتين الفلوري الأخضر ، لتشكيل طبقة أحادية للخلية المتوسطة ، في وسط أساسي بنسبة 10٪. قم بتربسين صفيحة من الخلايا المتوسطة وتدور في جهاز طرد مركزي منضدي بسرعة 900 دورة في الدقيقة لمدة ثلاث دقائق.

استنشاق المادة الطافية وإعادة تعليق الخلايا في وسط أساسي بنسبة 10٪. اضبط التركيز المطلوب مع 10٪ وسط أساسي. عند اكتمال حضانة الفبرونيكتين لمدة 30 دقيقة لطبق MatTek ، اغسل الآبار ب 2 مل من PBS. استنشق PBS واللوحة 6 مرات 10 إلى الخلايا المتوسطة الخامسة لكل بئر في كل بئر من طبق MatTek المكون من 6 آبار. احتضن طبق MatTek في حاضنة زراعة الخلايا بدرجة حرارة 37 درجة مئوية طوال الليل للسماح لخلايا الظهارة المتوسطة بالالتصاق بالطبق وتشكيل طبقة أحادية.

استخدم ماصة لجمع الكرويات لسرطان المبيض من الصفيحة المطلية ب 96 بئرا بولي هيما. استنشق الوسط من بئر واحد من طبق MatTek المكون من 6 آبار والذي يحتوي على طبقة أحادية الخلية الظهارية. يغسل مرة واحدة مع 2 مل من PBS. أضف كل الكرويات من الطبق المكون من 96 بئرا إلى بئر واحد من طبق MatTek. هذا ما يقرب من ثلاثة أضعاف عدد الكرويات التي سيتم تصويرها لحساب هبوط الكرويات على جزء من الطبق لا يمكن تصويره.

نظرا لأننا نريد تصوير كروي واحد فقط لكل مجال رؤية ، يجب تجنب تجميع الكرويات. هز الطبق برفق من جانب إلى آخر لتوزيع الكرويات بالتساوي عبر الطبقة الأحادية قبل أن تلتصق.

ضع طبق MatTek على مسرح مجهر مضان واسع المجال مقلوب قادر على إجراء تصوير بفاصل زمني لمدة ثماني ساعات على الأقل. استخدم مرحلة آلية لتصوير مواضع متعددة في الطبق ، مع أحداث إقحام كروية متعددة ، في تجربة واحدة. سوف تستقر كرويات خلايا سرطان المبيض في قاع الطبق وتلتصق بطبقة أحادية الخلية المتوسطة الظهارية. اجمع صور GFP و RFP و Phase ل 20 تفاعلا كرويا / أحادي الطبقة كل عشر دقائق لمدة ثماني ساعات.

14:25

تقييم سرطان المبيض كروي مرفق وغزو الخلايا الظهارية في الوقت الحقيقي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

13:04

في فيفو وفيفو السابقين المداخل لدراسة سرطان المبيض النقيلي الاستعمار من الهياكل التبانة بقعة في البريتوني الدهنية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:34

نمذجة السلوك سرطان المبيض متعددة الخلايا الجسم الشبه الكروي في Microdevice دينامية 3D البريتوني

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:18

كروي الفحص لقياس TGF - β بفعل الغزو

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:54

في الفحص المختبري التخليص الظهارية النماذج أن الخطوات في وقت مبكر من الإنبثاث سرطان المبيض

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:34

نمذجة ورم خبيث لسرطان المبيض في بطانة التجويف البريتوني: طريقة لإنشاء نموذج ثلاثي الأبعاد في المختبر للبطانة البريتونية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:36

عزل الخلايا الظهارية المتوسطة: تقنية لعزل الخلايا الظهارية المتوسطة الأولية من عينة أنسجة الثرب البشري

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:19

ثلاثي الأبعاد (3D) ورم الجسم الشبه الكروي الغزو الفحص

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

05:34

خلية السرطان كروي الفحص لتقييم الغزو في إعداد 3D

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:00

نمذجة خطوات المبكر عن سرطان المبيض نشر في الثقافة عضوي النمط من البريتوني تجويف الإنسان

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 29 أغسطس 2026