نوافذ البيض: طريقة لفتح قشرة بيضة الدجاج المخصبة لفضح الأوعية الدموية الغشائية المشيمية

في بيضة الدجاج المخصبة ، يكون الغشاء المشيمي أو CAM عبارة عن طبقة عالية الأوعية الدموية تقع أسفل غشاء قشر البيض الداخلي. يعمل على دعم نمو الجنين.

لفضح CAM المطور بالكامل ، ابدأ بوضع شمعة بيض - مصدر ضوء ساطع - على قشر البيض لتصور الجزء الداخلي من البيضة. حدد موقع الخلية الهوائية بين أغشية قشر البيض الخارجية والداخلية والأوعية الدموية المتفرعة البارزة داخل البويضة. ضع علامة على مواقعهم خارجيا.

في هذه البقع ، قم بعمل ثقوب دائرية صغيرة في قشر البيض لفضح غشاء القشرة البيضاء الأساسي. اخترق الغشاء المكشوف برفق في كلا الموقعين دون تعطيل الطب التكميلي والبديل أو التسبب في تسرب الألبومين أو الدم.

احتفظ بالبويضة طوليا ، ضع الشفط على فتحة خلية الهواء الطبيعية لسحب الهواء من الداخل. يؤدي الضغط السلبي الناتج إلى خفض CAM أسفل الفتحة الثانية ، مما يولد خلية هواء اصطناعية فوق شبكة الأوعية الدموية.

حدد الخطوط العريضة للخلية الهوائية التي تم نقلها. اقطع قشر البيض ، على بعد بضعة سنتيمترات من المخطط التفصيلي ، دون تعطيل حدود الخلية الهوائية-CAM. قم بإزالة الغلاف المقطوع لإنشاء نافذة كبيرة ، مما يؤدي إلى تعريض CAM والأوعية الدموية الأساسية. استخدم فيلما شفافا لإغلاق النافذة على بيض قابل للحياة.

في اليوم التنموي 7 أو 8 ، عندما يتطور الطب التكميلي والبديل بالكامل ، قم بإيقاف تشغيل محور دوار البيض وضع ما يقرب من 1 إلى 3 بيضات في رف البيض في خزانة السلامة البيولوجية. مع إطفاء الأنوار ، ضع شمعة بيضة على قشر البيض لتحديد موقع الخلية الهوائية لبيضة واحدة وتحديدها. بعد ذلك ، حرك شمعة البيض فوق القشرة للعثور على شبكة أوعية دموية كبيرة ، مع تدوير البيضة حسب الضرورة.

سوف تتفرع الأوعية الدموية المثالية بالقرب من منتصف البويضة. استخدم علامة لتتبع الأوعية الدموية لاستخدامها في الزرع. بعد إعادة تشغيل الضوء في غطاء المحرك ، استخدم أداة دوارة لاسلكية مزودة بحجر طحن من كربيد السيليكون لحفر ثقب صغير في الغلاف مباشرة فوق مركز الخلية الهوائية. عندما تتم إزالة معظم القشرة ، ولكن مع وجود غشاء داخلي أبيض سليم ، قم بحفر ثقب صغير آخر حيث سيتم فتح نافذة الأوعية الدموية كما هو موضح للتو. عندما يكون الثقب الثاني جاهزا ، استخدم إبرة قياس 18 لاختراق الغشاء الداخلي الأبيض برفق فوق الخلية الهوائية والأوعية الدموية ، مع الحرص على تعطل الغشاء الداخلي الأبيض ، ولكن ليس CAM ، في جميع أنحاء المنطقة المحفورة.

مع إطفاء ضوء الغطاء مرة أخرى ، استخدم شمعة البيض للتحقق من نقل الخلية الهوائية من نهاية البويضة إلى المنطقة الموجودة فوق الأوعية الدموية. إذا لزم الأمر، ضع الأنبوب المفرغ الذي يتم إدخاله في وحدة تحكم الماصة حول الفتحة الموجودة فوق خلية الهواء الأصلية وقم بتطبيق الشفط برفق على دفعات قصيرة لتحريك الخلية الهوائية. ضع علامة على الخطوط العريضة للموقع الجديد للخلية الهوائية ، حوالي 0.5 سم داخل حدود air-CAM ، وقم بتثبيت قطعة من شريط التعبئة كبيرة بما يكفي لتغطية الفتحة فوق الخلية الهوائية الجديدة.

بعد تحضير البيضتين الأخريين كما هو موضح للتو ، أعد البيض إلى الحاضنة وافتح أي بيضات إضافية للتجربة في مجموعات من 1 إلى 3 كما هو موضح. عند فتح كل البيض ، انقل 1 إلى 3 بيضات مع خلايا هوائية منقولة إلى رف البيض في خزانة السلامة الحيوية ، واستخدم أداة دوارة لاسلكية مزودة بعجلة قطع دائرية لقطع خط صغير فوق حدود الخلية الهوائية تماما عبر الخلية دون تعطيل CAM أو الأوعية الدموية. باستخدام مقص منحني ، قم بقص الخلية الهوائية المتبقية لإنشاء نافذة في القشرة والتحقق من صلاحية الجنين.

ستعرض الأجنة القابلة للحياة الأوعية الدموية واسعة النطاق ، والزلال الصافي ، وحركة الجنين ، و / أو ضربات قلب مرئية. في الأجنة غير القابلة للحياة ، قد يبدو الطب التكميلي والبديل معتما مع وجود عدد قليل من الأوعية ، إن وجدت ، وقد تكون الأجنة صغيرة أو غائبة دون حركة أو نبضات قلب. باستخدام ملقط Semken ، اسحب قطعا صغيرة من القطن من كرة قطنية معقمة وامسح سطح CAM للأجنة القابلة للحياة برفق لإزالة أي غبار وحطام قشرة. بعد ذلك ، قم بتغطية فتحة القشرة بقطعة ربع من ضمادة الفيلم الشفافة مقاس 6 × 7 سم دون لمس CAM ، وأعد البيض إلى الحاضنة بحيث تكون النافذة المفتوحة متجهة لأعلى. استخدم قطعة من رف البيض أو حافة دوار البيض أو أي عنصر مناسب آخر لدعم أي بيض يستمر في التدحرج.