موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:26 دقيقة • April 30th, 2023
غشاء المشيمة للدجاج ، أو CAM ، هو غشاء شديد الأوعية الدموية موجود في بيض بعض الفقاريات مثل الدجاج. يبطن هذا الغشاء خارج الجنين غشاء قشرة غير وعائي ويعمل كموقع لتبادل الأكسجين الغازي وثاني أكسيد الكربون بين الجنين والبيئة.
لإنشاء نموذج سرطان الطب التكميلي والبديل ، ابدأ ببيضة دجاج مخصبة قابلة للحياة تحمل CAM مطور بالكامل مع قشرة مفتوحة جزئيا تكشف الأوعية الدموية المتفرعة. تأكد من فصل CAM عن غشاء القشرة.
ضع حلقة معقمة غير لاصقة فوق نقطة فرع الأوعية الدموية. باستخدام قضيب زجاجي ، افرك الغشاء برفق داخل الحلقة لكشط الطبقة الظهارية الخارجية وفضح طبقة الأديم المتوسط الأساسية التي تحمل الأوعية الدموية. Pipet معلق مبرد للخلايا السرطانية ممزوجة بمصفوفة مناسبة خارج الخلية في الحلقة. الحلقة تقيد التشتت الخلوي.
اسمح للمصفوفة بالتصلب لتأمين الخلايا بداخلها. أغلق فتحة قشر البيض واحتضن البيضة في ظل الظروف المناسبة. توفر الأوعية الدموية الكثيفة داخل طبقة الأديم المتوسط الأكسجين والعناصر الغذائية الأساسية للخلايا السرطانية ، مما يوفر بيئة مكروية مناسبة لنموها وتوسعها.
لتحضير معلق الخلايا السرطانية للزرع ، قم بحصاد الخلايا من ثقافة الخلايا السرطانية ذات الأهمية وترسيب الخلايا عن طريق الطرد المركزي. استنشق المادة الطافية وأعد تعليق الخلايا ميكانيكيا في الوسط المتبقي. ضع معلق الخلية على الجليد واستخدم ماصة لقياس حجم الخلايا في الوسط. بعد ذلك ، قم بإعادة تعليق الخلايا بتركيز 1 إلى 2 مليون خلية في 20 إلى 100 ميكرولتر من الوسط ، مع استكمالها ب 2.7 إلى 4 ملليغرام لكل مليلتر مصفوفة خارج الخلية وأي عوامل نمو أو إضافات أخرى ذات أهمية.
لزرع الخلايا السرطانية ، باستخدام حلقة غير لاصقة ، ضع ما يصل إلى 6 بيضات ليتم زرعها على رف البيض ولف حواف ضمادة الفيلم الشفافة باتجاه النافذة المفتوحة لإزالة الفيلم من القشرة. تحقق مما إذا كان البيض قابلا للحياة وصحي. سيكون للبيض المثالي وعاء كبير به أوعية متفرعة أصغر داخل وسط المنطقة المفتوحة.
باستخدام ملقط القزحية المنحنية ، ضع حلقة معقمة غير لاصقة على CAM فوق الوعاء ، من الناحية المثالية فوق نقطة فرعية. استخدم قضيب تقليب زجاجي معقم لكشط الطب التكميلي والبديل برفق ووضع تعليق الخلية السرطانية في وسط الحلقة. عندما يتم تسليم جميع الخلايا ، أغلق الفتحة بقطعة ربع من ضمادة الفيلم الشفافة مقاس 6 × 7 سم وقم بتسمية البويضة بتسمية الزرع المناسبة. ثم ضع البيضة بإحكام في الحاضنة ، بحيث تكون فتحة القشرة في وضع مستقيم.