الفحص العضوي للبروستاتا: تقنية ثقافة خارج الجسم الحي القائمة على حلقة هلام المصفوفة لدراسة قدرة التمايز لخلايا ظهارة البروستاتا

تتكون ظهارة البروستاتا بشكل أساسي من الخلايا الظهارية القاعدية والظهارية اللمعة. تشكل طبقة أحادية من الخلايا القاعدية البطانة الخارجية للغدة وتدعم بقاء الخلايا اللمعية. على العكس من ذلك ، فإن الخلايا اللمعية تبطن التجويف وتفرز بروتينات خاصة بالبروستاتا.

لدراسة التمايز الظهاري للبروستاتا خارج الجسم الحي ، ابدأ بتعليق الخلايا الظهارية للبروستاتا القاعدية. امزج التعليق مع مصفوفة غشاء القاعدية المبردة بالنسبة المطلوبة. Pipet هذا الخليط بجوار قاعدة الجدار الداخلي للوحة ثقافة طاردة للخلايا. حرك الطبق حتى يشكل الخليط حلقة على طول محيط البئر.

احتضان اللوحة للسماح للمصفوفة بالتصلب. استكمل الثقافة بوسائط مفضلة. تدعم عوامل النمو في الوسائط تكاثر الخلايا الظهارية القاعدية. في الوقت نفسه ، تمنع الطبيعة الطاردة للخلايا لطبق الثقافة أي ارتباط بالخلية ، مما يشجع الخلايا على تكوين كرويات ثلاثية الأبعاد داخل المصفوفة.

بمرور الوقت ، تطور الأجسام الكروية الظهارة متعددة الطبقات. تتمايز الخلايا الظهارية القاعدية المبطنة للتجويف في النهاية وتشكل خلايا لمعية إفرازية ، مما يؤدي إلى ظهور هياكل غدية ثلاثية الأبعاد.

ابدأ هذا الإجراء بتحضير خلايا البروستاتا القاعدية واللمعية للفأر كما هو موضح في بروتوكول النص. اغسل حبيبات الخلية في 500 ميكرولتر من الوسائط العضوية للفأر. ثم, أعد تعليق الحبيبات بكثافة خلية 1,000 خلية لكل ميكرولتر. لتحضير الخلطات الرئيسية ، امزج الخلايا الظهارية المعلقة في الوسائط العضوية للفأر مع هلام المصفوفة لتوليد خليط نهائي يحتوي على 25٪ خلايا في الوسائط و 75٪ هلام مصفوفة. اعتمادا على التطبيق النهائي ، عادة ما يتم طلاء الخلايا القاعدية بتركيز 100 إلى 2,000 خلية لكل 80 ميكرولتر ، بينما يتم طلاء الخلايا اللمعية بتركيز 2,000 إلى 10,000 خلية لكل 80 ميكرولترا.

لكل خليط خلية ، أضف 80 ميكرولترا من هلام المصفوفة لكل بئر من لوح 24 بئرا. قم بوضع قطرة على النصف السفلي من جدار البئر مع تجنب الاتصال المباشر بطلاء بولي هيما. بعد إضافة هلام المصفوفة ، قم بتدوير اللوحة للسماح لخليط خلية المصفوفة بتشكيل حلقة حول حافة البئر. ضع اللوحة المكونة من 24 بئرا في حاضنة 37 درجة مئوية 5٪ CO2 ، الجانب الأيمن لأعلى ، لمدة 10 دقائق للسماح لهلام المصفوفة بالتصلب جزئيا.

بعد الحضانة لمدة 10 دقائق ، اقلب اللوحة المكونة من 24 بئرا رأسا على عقب واحتضنها لمدة 50 دقيقة إضافية للسماح لهلام المصفوفة بالتصلب تماما. بعد ذلك ، أضف 350 ميكرولترا من الوسائط العضوية للفأر المسخنة مسبقا ، من حيث القطرة ، إلى وسط كل بئر. بعد إضافة الوسائط ، أعد اللوحة المكونة من 24 بئرا إلى الحاضنة.

لتجديد الوسائط العضوية للفأر، قم بإمالة اللوحة المكونة من 24 بئرا بزاوية 45 درجة وقم بإزالة الوسائط الموجودة برفق من مركز كل بئر باستخدام ماصة P1000 مع تجنب حلقة هلام المصفوفة. أضف 350 ميكرولترا من الوسائط العضوية للفأر المسخنة مسبقا كما كان من قبل. يوصى بإضافة كمية أكبر من الوسائط إلى العضيات المستزرعة لمدة تزيد عن خمسة أيام لمنع النضوب السريع للعناصر الغذائية الرئيسية وعوامل النمو.

• Prostate Epithelium - Consists of basal and luminal cells forming the prostate gland's structure.
• Basal Cells - Cells forming the outer lining of the prostate epithelium.
• Luminal Cells - Cells lining the lumen of the prostate gland and secreting prostate-specific proteins.
• 3D Spheroids - Cell structures formed in a cell-repellent environment.
• Organoid Assay - A method to study cell differentiation and formation of 3D glandular structures ex vivo.

• Introduction to Prostate Epithelium - It is formed of basal and luminal cells (e.g., prostate epithelial cells).
• Outline of Cellular Components - Basal cells support luminal cell survival; luminal cells line the lumen (e.g., organoid assay).
• Explanation of 3D Spheroids Formation - Grown within a matrix in a cell-repellent environment.
• Connection to Experiment - Formation of luminal cells from basal cells in 3D glandular structures.

• What are prostate epithelial cells and their role in the prostate epithelium?
• How does the organoid assay contribute to the study of prostatic epithelial differentiation?
• What is the process of 3D spheroids formation in a cell-repellent environment?

• Practical Applications - Used to study cell differentiation and formation of glandular structures ex vivo (e.g., organoid assay).
• Industry Impact - Crucial for biomedical research and development in urology (e.g., prostate health).
• Societal Importance - Contributes to better understanding and treatment of prostate diseases (e.g., prostate cancer).
• Scientific Advancements - Enabled the study of prostate cell proliferation and differentiation.