موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:08 دقيقة • April 30th, 2023
يجد تحلل الخلية ، أو السائل الذي يحتوي على محتويات الخلايا المحللة ، تطبيقا في العمليات النهائية مثل استخراج البروتين وتحليله. تكشف دراسة هذه الكسور عن معلومات حول خصائص ووظائف الخلايا.
لتحضير محللات البروتين العضوي ، ابدأ بثقافة العضيات المزروعة في مصفوفة غشاء القاعدية المرغوبة. قم بإزالة وسائط الثقافة المستهلكة من الطبق. أضف وسائط دافئة تحتوي على البروتياز فوق المصفوفة. Pipet مرارا وتكرارا لإخراج المصفوفة من الطبق.
احتضان الخليط. تعمل الإنزيمات المحللة للبروتين في الوسائط على تحلل المصفوفة وتطلق العضيات في المحلول. الطرد المركزي للعينة لفصل العضيات عن المادة الطافية المحتوية على الإنزيم.
أعد تعليق الحبيبات العضوية في مخزن مؤقت مناسب لتحلل البروتين. احتضان العينة. تعطل المنظفات الموجودة في المخزن المؤقت أغشية خلايا العضيات ، وتطلق محتويات داخل الخلايا في المحلول. في الوقت نفسه ، تعمل مثبطات البروتين في المخزن المؤقت على تعطيل أي إنزيمات بروتاز وفوسفاتيز تم إطلاقها ، مما يمنع تدهور بروتينات الركيزة.
علاوة على ذلك ، صوتنة الخليط لتعطيل الخلايا تماما. يتمزق الغلاف النووي ويطلق البروتينات النووية في المحلول. تقوم الموجات الصوتية أيضا بقص الأحماض النووية المنبعثة ، مما يمنعها من تلويث محللات البروتين.
لجمع العضيات ، قم بتفجير هلام المصفوفة بشكل متكرر عن طريق سحب 1 مليلتر من الوسائط الم
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية