التصوير المناعي الكامل: تقنية التثبيت والتلوين لتقييم العضيات السليمة

تشكل عضيات البروستاتا في المقام الأول طبقة خارجية من الخلايا الظهارية القاعدية والطبقات الداخلية للخلايا الظهارية اللمعية مرتبة حول تجويف مركزي.

يسمح التصوير الكامل بدراسة العضيات ثلاثية الأبعاد السليمة مع الحفاظ على مورفولوجيتها وعدم تجانسها. لبدء التلوين ، عالج العضيات بمثبت مناسب لقفل مكوناتها الخلوية في مكانها ، وبالتالي الحفاظ عليها. اغسل العينة لإزالة المثبتات الزائدة.

احتضن بمزيج من محلول الحجب وصبغة تلطيخ الحمض النووي. ترتبط البروتينات الموجودة في محلول الانسداد بشكل سلبي بمواقع غير محددة من الخلايا وتقلل من أي تلطيخ في الخلفية. في الوقت نفسه ، تلطخ صبغة الحمض النووي نوى الخلايا.

أضف مجموعتين من الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف مستضدات معينة تعبر عنها مجموعات الخلايا المكونة. احتضان باثنين من الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بصبغة الفلورسنت التي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية. اغسل العينة لإزالة أي أجسام مضادة غير مرتبطة.

اغمر العضيات الملطخة بالتتابع في تركيزات متزايدة من محاليل السكر المحتوية على الفاعل بالسطح لتحسين شفافية الأنسجة دون المساس بالبنية العضوية. يعزز هذا العلاج عمق تصوير العينة.

قم بتركيب العضيات على شريحة مجهرية تحمل فواصل للحفاظ على مورفولوجيتها ثلاثية الأبعاد أثناء التصوير. استخدم مجهرا متحد البؤر لمراقبة انبعاثات التألق من مجموعات الخلايا القاعدية و