أخذ عينات الخلية المفردة باستخدام التشريح الدقيق بالليزر: تقنية لحصاد الخلايا المستهدفة من مجموعة خلايا غير متجانسة

يساعد التشريح الدقيق للالتقاط بالليزر على شراء خلية مستهدفة واحدة من خليط خلوي محضر على شريحة زجاجية. ابدأ بأخذ شريحة زجاجية مناسبة مطلية بغشاء خامل كيميائي حيوي منفذ للأشعة فوق البنفسجية على سطحه. قم بتعريض الشريحة للأشعة فوق البنفسجية لجعلها أكثر محبة للماء لتحسين التصاق الخلايا.

قم بتجميع الشريحة في جهاز الطرد المركزي الخلوي. أضف تعليق الخلية إلى منفذ القمع للجهاز. جهاز الطرد المركزي للسماح لقوة الطرد المركزي بالتركيز وإيداع طبقة أحادية من الخلايا على مساحة صغيرة على الشريحة الزجاجية. اترك الشريحة تجف في الهواء.

ضع الشريحة ، بحيث يكون جانب العينة لأعلى ، تحت مجهر التشريح المجهري بالليزر. حدد المنطقة المحيطة بالخلية محل الاهتمام. الآن ، ركز شعاع الليزر لتشريح المنطقة المحتوية على الخلية المستهدفة جنبا إلى جنب مع طلاء الغشاء. بعد ذلك ، قم بإلغاء تركيز شعاع الليزر ونبضه لتوليد الضغط. تقوم هذه الطاقة بقذف المنطقة التي تم تشريحها بدقة إلى الغطاء المقلوب لأنبوب تجميع مجمع مسبقا يحتوي على مخزن مؤقت يوضع فوق الشريحة.

استرجع الأنبوب وأغلق غطاءه. قم بتدوير الأنبوب لإحضار المخزن المؤقت الذي يحتوي على الخلية المستهدفة المفردة إلى قاع الأنبوب. قم بتبريد الأنبوب حتى مزيد من التحليل.

بالنسبة للتشريح بالليزر ، قم بالطرد المركزي الخلوي بالكامل 300 ميكرولتر من تعليق الخلية على شريحة مغلفة بالغشاء عند 300 × جم لمدة 5 دقائق. بعد ذلك ، ضع الشريحة المطلية بالغشاء على مجهر قادر على تشريح الليزر. بعد ذلك ، يتم خلط 4.5 ميكرولتر من تحلل الخلايا الرئيسي في غطاء أنبوب PCR سعة 0.2 ملليلتر.

ضع الغطاء فوق العينة واحصد خلية واحدة عن طريق التشريح المجهري بالليزر. بعد ذلك مباشرة ، تحقق من وجود خلايا معزولة في غطاء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). قم بإزالة أنبوب PCR من مجهر التسلخ بالليزر وأغلق الأنبوب. اجمع كل السائل في الجزء السفلي من الأنبوب بدوران قصير.