أخذ عينات الخلية المفردة باستخدام التشريح الدقيق بالليزر: تقنية لحصاد الخلايا المستهدفة من مجموعة خلايا غير متجانسة
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 2:30 دقيقة • April 30th, 2023
يساعد التشريح الدقيق للالتقاط بالليزر على شراء خلية مستهدفة واحدة من خليط خلوي محضر على شريحة زجاجية. ابدأ بأخذ شريحة زجاجية مناسبة مطلية بغشاء خامل كيميائي حيوي منفذ للأشعة فوق البنفسجية على سطحه. قم بتعريض الشريحة للأشعة فوق البنفسجية لجعلها أكثر محبة للماء لتحسين التصاق الخلايا.
قم بتجميع الشريحة في جهاز الطرد المركزي الخلوي. أضف تعليق الخلية إلى منفذ القمع للجهاز. جهاز الطرد المركزي للسماح لقوة الطرد المركزي بالتركيز وإيداع طبقة أحادية من الخلايا على مساحة صغيرة على الشريحة الزجاجية. اترك الشريحة تجف في الهواء.
ضع الشريحة ، بحيث يكون جانب العينة لأعلى ، تحت مجهر التشريح المجهري بالليزر. حدد المنطقة المحيطة بالخلية محل الاهتمام. الآن ، ركز شعاع الليزر لتشريح المنطقة المحتوية على الخلية المستهدفة جنبا إلى جنب مع طلاء الغشاء. بعد ذلك ، قم بإلغاء تركيز شعاع الليزر ونبضه لتوليد الضغط. تقوم هذه الطاقة بقذف المنطقة التي تم تشريحها بدقة إلى الغطاء المقلوب لأنبوب تجميع مجمع مسبقا يحتوي على مخزن مؤقت يوضع فوق الشريحة.
استرجع الأنبوب وأغلق غطاءه. قم بتدوير الأنبوب لإحضار المخزن المؤقت الذي يحتوي على الخلية المستهدفة المفردة إلى قاع الأنبوب. قم بتبريد الأنبوب حتى مزيد من التحليل.
بالنسبة للتشريح بالليزر ، قم بالطرد المركزي الخلوي بالكامل 300 ميكرولتر من تعليق الخلية على شريحة مغلفة بالغشاء
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية