موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:28 دقيقة • April 30th, 2023
لتقييم المقاومة الكيميائية في الخلايا السرطانية ، ابدأ بأخذ طبق متعدد الآبار. قم بزرع معلق لخلايا سرطان البروستاتا الحساسة للأدوية المرغوبة في عدد قليل من الآبار وتعليق المتغير المقاوم للأدوية للخلايا في الآبار المتبقية.
احتضان المزرعة لتسهيل ارتباط الخلايا بلوحة الثقافة. عالج كلا النوعين من الخلايا بمجموعة من الجرعات المتزايدة من محلول الدواء المحدد. تدخل جزيئات الدواء إلى الخلايا الحساسة وتسبب موت الخلايا حتى عند أدنى تركيزاتها. ومع ذلك ، فإن الخلايا المقاومة تطرد جزيئات الدواء من خلال مضخات تدفق الأدوية المتخصصة ، مما يتيح بقائها على قيد الحياة على الرغم من تعرضها لتركيزات أعلى من الأدوية.
استنشق الوسائط المستهلكة التي تحتوي على الحطام ومحلول الأدوية. مكمل غذائي مع وسائط نمو طازجة خالية من الأدوية. احتضان للسماح للخلايا المقاومة للأدوية الباقية بالتكاثر وتشكيل المستعمرات. أضف محلول تلطيخ مناسب لتلوين مستعمرات الخلايا الحية.
اغسل المزرعة لإزالة الصبغة الزائدة. احسب عدد المستعمرات الملونة في كل بئر. تحتوي الآبار التي تحتوي على خلايا حساسة للأدوية على عدد قليل جدا من المستعمرات القابلة للحياة. في المقابل ، تظهر الآبار التي تحتوي على خلايا مقاومة للأدوية عددا أكبر من المستعمرات. ومع ذلك ، تظهر هذه الخلايا المقاومة للأدوية انخفاضا في عدد المستعمرات مع زيادة جرعات الأدوية.
في هذا الإجراء ، قم بلوحة 2,000 خلية باستخدام 2 ملليلتر من الوسائط لكل بئر في الألواح المكونة من 6 آبار. بعد 24 ساعة ، أضف تركيزات متزايدة من الدوسيتاكسيل لكل من خطوط الخلايا DU145 و 22Rv1. أضف DMSO إلى بئر واحد فقط كعنصر تحكم بنفس الحجم المستخدم لأعلى جرعة من الدوسيتاكسل. بعد 72 ساعة ، استنشق الوسائط المحتوية على الدواء وأضف وسائط جديدة خالية من الدوسيتاكسل.
احتضان الألواح لمدة 1 إلى 2 أسابيع حتى تظهر المستعمرات تحت المجهر. لتلطيخ المستعمرات ، اغسلها برفق باستخدام 2 إلى 3 ملليلتر من PBS واحتضانها ب 2 إلى 3 مل من محلول البنفسجي البلوري لمدة 20 دقيقة داخل غطاء مزرعة الأنسجة أو غطاء الدخان.
بعد ذلك ، قم بإزالة محلول التلوين وغسل الألواح ب 2 إلى 3 مل من الماء. ثم قم بإزالة الماء وجفف الأطباق بالهواء. التقط صورا رقمية للوحات لتمثيل الشكل. قم بتحليل النتيجة عن طريق تصور الآبار وعد المستعمرات يدويا بمساعدة قلم تحديد وتمثيل النسبة المئوية لصلاحية الخلية في الرسم البياني.