استخراج البروتين وتحلل البروتين: طريقة للحصول على البروتينات من عينات أنسجة ورم البروستاتا وهضمها الأنزيمي إلى الببتيدات

0 مشاهدات4:03 د • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بعينة من أنسجة ورم البروستاتا. أعد تعليقه في مخزن مؤقت للتحلل المبرد لبدء تحلل الخلايا. استخدم الخالط لتحطيم هياكل الأنسجة بشكل أكبر وإطلاق مكوناتها داخل الخلايا. قم بتقطيع العينة على الجليد لضمان تحلل الخلايا بالكامل وقص الحمض النووي لمنع التداخل أثناء معالجة الببتيد. قم بتسخين المحللة لتعطيل البنية الثلاثية للبروتينات وتتكشف عنها.

تشق العوامل المختزلة في المخزن المؤقت روابط ثاني كبريتيد بين بقايا السيستين. بعد ذلك ، تعمل عوامل الألكلة في مجموعات الثيول الخالية من الألكيلات العازلة من السيستين المختزل لمنع إصلاح رابطة ثاني كبريتيد. تسهل عوامل تغيير الطبيعة الإضافية في المخزن المؤقت التمسخ المتحكم فيه وزيادة ظهور البروتينات.

جهاز طرد مركزي لتكوير بقايا الأنسجة وأي ملوثات. اجمع المادة الطافية التي تحتوي على خليط البروتين في أنبوب جديد. أضف إنزيم إندوببتيداز ليسيل لشق روابط الببتيد في البروتينات عند الطرف C من بقايا اللايسين ، لتشكيل ببتيدات كبيرة. علاوة على ذلك ، عالج بإنزيم التربسين لشق روابط الببتيد عند الطرف C من بقايا اللايسين والأرجينين وتوليد ببتيدات أصغر. انقل الخليط إلى وحدة مرشح الطرد المركزي.

جهاز طرد مركزي للسماح للببتيدات المهضومة بالتغلغل عبر مسام غشاء المرشح والتجمع كتدفق من خلال. أي شظايا كبيرة تبقى كمحتجزة.

لحصاد أنسجة الورم ، قم بوزن الورم ، وفي أنبوب اختبار الثقافة ، أضف 2 مل من محلول التحلل المثلج لكل 100 ملليغرام من الأنسجة. بعد ذلك ، استخدم الخالط المحمول باليد أو على المنضدة لتجانس المحلل.

لتقليل العينة وألكلتها، قم بتسخين الأنبوب على حرارة 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق، ثم قم بتبريد العينة على الثلج لمدة 15 دقيقة. بينما لا تزال على الجليد ، قم بصوتنة المحللة ثلاث مرات. ثم سخني العينة على حرارة 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.

ضع أنبوب الصوتنة هذا في دوار دلو متأرجح وقم بالطرد المركزي للمحللات عند 3,500 × جم و 15 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. ثم اجمع المادة الطافية وتخلص من الحبيبات. لهضم المحللة ، استخدم 100 ملليمولار تريس لتخفيف العينة 12 ضعفا لتقليل كمية الجوانيدينيوم. للحصول على 5 ملليغرامات من البروتين ، أضف 10 ميكروغرام من Lysyl Endopeptidase ، أو Lys-C ، واحتضن العينة في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 إلى 6 ساعات.

تحضير 1 ملليغرام لكل مليلتر من التربسين المعالج ب TPCK في 1 ملليمولار حمض الهيدروكلوريك مع 20 ملليمولار كلوريد الكالسيوم والتربسين المضاف بنسبة 1 إلى 100 تريبسين إلى البروتين. احتضان العينة عند 37 درجة مئوية لمدة 3 ساعات. بعد ذلك ، أضف كمية إضافية من التربسين إلى الأنبوب واحتضان العينة عند 37 درجة مئوية طوال الليل.

أضف العينة إلى مرشح قطع سعة 15 مليلتر و 10 كيلو دالتون. قم بالطرد المركزي للعينة في دلو متأرجح أو دوار بزاوية ثابتة عند 3,500 × جم و 15 درجة مئوية حتى يصبح حجم الاحتباس أقل من 250 ميكرولترا. ثم اجمع التدفق وتخلص من المحتجز.

08:09

والمائية الميكروبية Metaproteomics سير العمل: من الخلايا إلى زيتية الببتيدات مناسبة لتحليل يستند الطيف، جنبا إلى جنب الشامل

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:28

إثراء خارج الخلية مصفوفة البروتينات من الأنسجة والهضم في الببتيدات لتحليل الطيف الكتلي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:03

توصيف البروتينات الخلوية مع الأكسدة الضوئية السريعة في الخلية من البروتينات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:21

تنقية الببتيد: تقنية قائمة على RP-HPLC لاستخراج الببتيدات من محللات البروتين المهضومة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:33

تخصيب الفوسفوببتيدات القائم على ثاني أكسيد التيتانيوم: طريقة للعزل الانتقائي للفوسفوببتيدات من مكتبة الببتيد

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:20

إعداد نموذج البروتين من الفورمالين الثابتة والبارافين جزءا لا يتجزأ من نسيج

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:08

الكمي قداس الطيفية من التنميط Proteomes خلايا السرطان المستمدة من السائل والأورام الصلبة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:23

تخصيب فوسفوبيبتيدي مقترنة بكمية خالية من تسمية الطيف الكتلي للتحقيق في فوسفوبروتيومي في سرطان البروستاتا

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:13

التسلسل الصغيرة غير الترميز RNA من Formalin-الانسجه الثابتة ومصل المشتقات Exosomes من المرضي سرطان البروستاتا المقاوم

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:40

نهج البروتينات القائم على قياس الطيف الكتلي لتحليل مثيلة البروتين R العالمية وعالية الثقة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 22 أغسطس 2026