موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:50 دقيقة • April 30th, 2023
تولد فسفرة بقايا الأحماض الأمينية المحددة ، مثل التيروزين ، الفوسفوربتيدات التي تلعب أدوارا حاسمة في تنظيم العديد من مسارات الإشارات الخلوية. تسمح دراستها بتحديد المؤشرات الحيوية المحتملة لعلاج السرطان.
لعزل الفوسفوببتيدات ، ابدأ بمسحوق مجفف بالتجميد من هضم الببتيد المنقى المستخرج من الأنسجة السرطانية. أعد تعليق المسحوق في مخزن مؤقت مناسب لإعداد تعليق ببتيد موحد. حافظ على درجة حموضة محايدة لضمان استقرار الببتيد.
قم بإعداد ملاط يتكون من حبات هيدروجيل مترافقة مع أجسام مضادة محددة مضادة للفوسفوببتيد في المخزن المؤقت المطلوب. أضف ملاط الخرزة إلى تعليق الببتيد. تتعرف الأجسام المضادة المثبتة على الخرزات وترتبط ببقايا الأحماض الأمينية الفسفرية الخاصة بها داخل الفوسفوربتيدات ، وتشكل مجمعات.
الطرد المركزي الخليط لجمع مجمعات حبة الفوسفوببتيد في الحبيبات. قم بإزالة المادة الطافية التي تحتوي على ببتيدات غير مرتبطة أو فوسفوببتيدات غير محددة. أضف مخزلا مناسبا لشطف الأس الهيدروجيني المنخفض إلى المجمعات واحتضنها. يضعف الرقم الهيدروجيني المنخفض التفاعل بين بقايا الفوسفوببتيد ومجمعات حبات الأجسام المضادة ، مما يؤدي إلى إطلاق الببتيدات في المحلول.
انقل الخليط إلى خرطوشة فلتر مجمعة مسبقا. جهاز طرد مركزي لتصفية الفوسفوببتيدات المنبعثة في أنبوب التجميع. قم بتركيز العينة بالتفريغ عند درجة حرارة مرتفعة لإ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية