موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 2:43 دقيقة • April 30th, 2023
تسمح تقنية تضمين البارافين الثابت بالفورمالين أو تقنية FFPE بالحفاظ على عينات الأنسجة الثابتة والمجففة والمنظوفة داخل كتل البارافين للتخزين طويل الأجل. يحافظ FFPE على البروتينات والمكونات الحيوية الأخرى داخل الخلايا دون المساس بمورفولوجيا الأنسجة.
يعدإزالة البارافينات ، أو إزالة شمع البارافين المحيط بالأنسجة المضمنة ، خطوة حاسمة قبل معالجة أي عينة من أنسجة FFPE لتحليلها في اتجاه مجرى النهر. لبدء إزالة البارافين ، ابدأ بشريحة زجاجية تحمل قسم من أنسجة FFPE غير ملوثة ذات أهمية ذات سمك مناسب.
اغمر قسم الأنسجة في حمام الزيلين واحتضنه للمدة المطلوبة. الزيلين ، مذيب عضوي ، يذيب شمع البارافين الذي تم تضمينه واختراقه في الأنسجة. تكشف الإزالة الكاملة لشمع البارافين عن عينة الأنسجة الشفافة الثابتة والمجففة.
بعد إزالة البارافينات ، عالج العينة بالإيثانول المطلق. يزيح الإيثانول ويزيل أي آثار للزيلين من قسم الأنسجة. بعد ذلك ، اغمر الأنسجة في تركيزات متناقصة من الإيثانول. تعمل العملية على ترطيب الأنسجة للتحليل النسيجي النهائي.
أخيرا ، اترك الشريحة دون إزعاج للمدة المطلوبة. تسمح هذه الخطوة للإيثانول والماء بالتبخر والحصول على قسم جاف من الأنسجة المرطبة.
للبدء ، قم بإعداد 10 ميكرومتر من الأقسام المدمجة بالبارافين الثابتة بالفورمالين غير الملوثة. ضع الشرائح في حامل منزلق زجاجي واملأه بالزيلين ، مع التأكد من غمر جميع الأنسجة الموجودة على الشريحة. اترك الشرائح في الزيلين لمدة 15 دقيقة. ثم اسكب الزيلين أثناء الإمساك بالشرائح بطرف ماصة حتى لا تسقط. صب المزيد من الزيلين إلى نفس المستوى كما كان من قبل وكرر الحضانة.
اسكب الزيلين واملأ حامل الشريحة بالإيثانول بنسبة 100٪ ، مع التأكد من أن جميع الأنسجة الموجودة على الشريحة مغمورة بالكامل. اترك الشرائح في الإيثانول لمدة 3 دقائق. ثم استبدل الإيثانول بالإيثانول الطازج واتركه يحتضن لمدة دقيقتين أخريين. اسكب الإيثانول وأزل الشرائح. ضعها بعناية على منشفة ورقية نظيفة واتركها تجف لمدة 10 دقائق.