تحويل ثنائي الكبريتيت للحمض النووي الجيني: طريقة لدراسة مثيلة الحمض النووي في عينات الحمض النووي الجينومي من أنسجة سرطان الجهاز الهضمي

تتضمن مثيلة الحمض النووي إضافة مجموعة الميثيل إلى بقايا السيتوزين من الحمض النووي لتكوين ميثيل السيتوزين ، مما يتسبب في تغيير الحمض النووي وتنظيم التعبير الجيني.

لدراسة مثيلة الحمض النووي ، ابدأ بأخذ مستخلص الحمض النووي الخام من الخلايا السرطانية. أضف مخزنا مؤقتا للتخفيف واحتضنه في درجة حرارة الغرفة. يخفف المخزن المؤقت الخليط ويفسد طبيعة الحمض النووي المزدوج الشريطة إلى حمض نووي أحادي الشريطة ، مما يفضل إمكانية الوصول إلى القواعد للتفاعلات اللاحقة.

أضف كاشف تحويل واحتضنه في الظلام. يؤدي ثنائي كبريتيت الصوديوم الموجود في الكاشف إلى حدوث كبريتات وإزالة أمينين لاحقا لبقايا السيتوزين غير الميثيلة ، مما يؤدي إلى تكوين اليوراسيل والسلفونات. ومع ذلك ، تظل بقايا السيتوزين الميثيلية دون تغيير.

بعد ذلك ، استكمل الحمض النووي بمخزن مؤقت ملزم ونقله إلى عمود مرشح دوران مجمع مسبقا. يساعد المخزن المؤقت الحمض النووي على الارتباط بالمرشح.

جهاز طرد مركزي لإزالة مزيج كاشف المخزن المؤقت وثنائي الكبريتيت من الحمض النووي المحاصر في العمود. تجاهل التدفق. أضف مخزن مؤقت لإزالة الكبريت القلوي إلى الحمض النووي. يساعد المخزن المؤقت في إزالة مجموعة الكبريتيت من اليوراسيل سلفونات لتكوين اليوراسيل.

جهاز طرد مركزي لإزالة المخزن المؤقت المستهلك. الآن ، أضف مخزن مؤقت للشطف إلى العمود لمسح الحمض النووي المحول. إجراء