موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:00 دقيقة • April 30th, 2023
يساعد تلطيخ الألياف المرنة في فحص غزو الخلايا السرطانية خارج الصفيحة المرنة البريتونية أو الأنسجة المرنة تحت الظهارة المتوسطة.
للبدء ، أضف محلول برمنجنات البوتاسيوم إلى قسم الأنسجة المعالجة ، متبوعا بالغمر في حمض الأكساليك. تعمل خاصية المؤكسدة القوية لمزيج برمنجنات البوتاسيوم وحمض الأكساليك على تبييض الصبغة الطبيعية من قسم الأنسجة لمنع التداخل في عملية التلوين عن طريق حجب مورفولوجيا الألياف المرنة.
اشطف الشريحة بالماء والإيثانول لإزالة أي عامل تبييض متبقي. بعد ذلك ، احتضان العينة في صبغة الإيلاستين التي تتكون من مركب الحديد والهيماتوكسيلين. الإيلاستين ، المكون الرئيسي للألياف المرنة ، له تقارب قوي مع مجمعات الحديد والهيماتوكسيلين.
اغسل الشريحة بالإيثانول والماء لإزالة أي بقعة متبقية. أخيرا ، عالج العينة بقعة مضادة تحتوي على حمض البيكريك و Ponceau S. تخترق جزيئات حمض البيكريك الأصغر جميع أنواع الأنسجة ولكن يتم الاحتفاظ بها بقوة بواسطة الخلايا العضلية والسرطانية القريبة. في المقابل ، فإن جزيئات Ponceau S الأكبر حجما تحل محل حمض البيكريك في الكولاجين المسامي ، مما يتسبب في تلطيخ الكولاجين بشكل مختلف عن العضلات والخلايا السرطانية.
عند ملاحظتها تحت المجهر ، تظهر الألياف المرنة على شكل خيوط زرقاء سوداء. بقع الكولاجين باللون الأحمر ، بينما تظهر خلايا العضلات والسرطان باللون الأصفر. تؤكد الخلايا السرطانية الصفراء التي تخترق الصفيحة المرنة ذات اللون الأزرق والأسود الغزو النقيلي.
أولا ، استخدم المناديل الورقية لمسح أي محلول زائد على الشريحة أو حول المنديل. ضع الشرائح في ظروف تتناسب مع درجة حرارة الغرفة والرطوبة. أضف بضع قطرات من برمنجنات البوتاسيوم إلى كل شريحة لأكسدتها ، مع التأكد من أن الحجم المضاف كاف لتغطية قسم الأنسجة في كل شريحة. بعد 5 دقائق ، اشطف الشرائح المؤكسدة بالماء المقطر في برطمانات كوبلين ، وكرر الشطف مرتين إلى ثلاث مرات ، واستخدم جرة جديدة من الماء لكل شطف. يجب أن يكون للأنسجة لون بني ملحوظ.
الآن ، أضف بضع قطرات من حمض الأكساليك إلى كل شريحة لتبييضها ، مع التأكد من أن الحجم المضاف كاف لتغطية قسم الأنسجة في كل شريحة. بعد 5 دقائق ، اشطف شرائح التبييض بالماء المقطر ، وكرر الشطف مرتين إلى ثلاث مرات ، واستخدم جرة جديدة من الماء لكل شطف. اغسل الشرائح لفترة وجيزة في كحول 95٪.
اغمر الشرائح المغسولة في محلول الإيلاستين لمدة 8 إلى 24 ساعة. بعد ذلك ، اغمر الشرائح مباشرة في 95٪ من الإيثانول لمدة 1 إلى 2 دقيقة للتمييز بين كل قسم من أقسام الأنسجة جيدا. شطف الشرائح تماما بالماء المقطر.
تحقق مجهريا بحثا عن تلطيخ الألياف المرنة باللون الأزرق والأسود والخلفية الرمادية. من الأفضل أن تفرق قليلا بين الأنسجة لأن بقعة Van Gieson اللاحقة يمكن أن تستخرج إلى حد ما البقعة المرنة.
قم بتغطيةالشرائح في محلول Van Gieson لمدة 1 دقيقة ، مع التأكد من أن الحجم المستخدم كاف لتغطية قسم المناديل في كل شريحة تماما. بعد ذلك ، قم بإسقاط 95٪ من الإيثانول بسرعة على شرائح الأنسجة لبضع ثوان للتمييز بين كل قسم من أقسام الأنسجة جيدا.