تقسيم الكرويات للزراعة الفرعية والشحن: إجراء لتكاثر ونقل الكرويات من ورم الغدد الصم العصبية في الأمعاء الدقيقة

الكرات الكروية هي في المختبر الثقافات للخلايا المجمعة ذاتيا لتشكيل هياكل كروية ثلاثية الأبعاد. لنشر كرويات الورم ، ابدأ بالكرات المستزرعة في مصفوفة مناسبة خارج الخلية ، أو ECM ، الموجودة في لوحة المزرعة.

قم بعمل ثلاثية باستخدام ماصة دقيقة لكسر ECM ميكانيكيا وفك الكرويات. انقل مزيج كروي ECM إلى أنبوب طرد مركزي دقيق.

جهاز طرد مركزي بسرعة منخفضة لتكوير الكرويات وفصلها عن ECM في المادة الطافية. تخلص من المادة الطافية المستهلكة المحتوية على ECM. انقل الأنبوب الذي يحتوي على الحبيبات الكروية على الجليد لمنع تصلب ECM أثناء الخطوات اللاحقة.

استكمل الحبيبات ب ECM المسال الطازج. للزراعة الفرعية ، امزج المحتويات عن طريق سحب العينات لأعلى ولأسفل بشكل متكرر لفصل الخلايا الكروية وإطلاقها في حالة تعليق.

قم بزرع هذا الخليط الذي يحتوي على خلايا مكونة للكروية و ECM في طبق استزراع طازج. تصلب ECM ، مما يتيح محاصرة الخلايا السرطانية. أضف وسط النمو المطلوب. احتضان لتسهيل نمو الخلايا المحاصرة إلى كرويات جديدة.

لأغراض الشحن ، انقل خليط كروي ECM إلى قارورة ثقافة. اسمح ل ECM بترسيخ الكرات الموجودة بداخلها وإيقاعها.

املأ القارورة بوسائط النمو لتجنب قص الخلايا والحفاظ على صلاحية الكرويات. انقل القارورة إلى طرد الشحن.

قم بكسر ECM ميكانيكيا باستخدام ماصة P1000 ونقلها إلى أنبوب معقم مقاس 1.5 ملم. جهاز الطرد المركزي للأنبوب عند 1,000 × جم عند 4 درجات مئوية. ثم قم بإزالة كل المواد الطافية وضع الأنبوب على الجليد. أضف ضعفين إلى أربعة أضعاف حجم ECM الجديد إلى الحبيبات واخلط محتويات الأنبوب عن طريق سحب العينات لأعلى ولأسفل 10 مرات ، مع التأكد من تجنب إدخال فقاعات الهواء.

انقل 5 إلى 20 ميكرولترا من ECM في خليط SBNET إلى لوحة جديدة سعة 96 بئرا واترك ECM تتصلب. بعد ذلك ، قم بتغطية ECM المتصلب بوسيط SBNET جديد وضع اللوحة في الحاضنة. في حالة شحن كرويات SBNET إلى مختبر آخر، قم بنقل الفيرويات باستخدام ECM الجديد إلى قارورة T25 واسمح ل ECM بالتصلب. املأ القارورة بوسط كروي SBNET ، وقم بربط الغطاء بإحكام ، وقم بإعداد عبوة الشحن.