JoVE Encyclopedia of Experiments
أبحاث السرطان
0 مشاهدات • 3:05 د • April 30th, 2023
أثناء الحالات المرضية مثل السرطان ، تطلق العدلات المنشطة مصائد عدلات خارج الخلية أو NETs - وهي شبكة من ألياف الحمض النووي خارج الخلية المرتبطة بالهيستونات والإنزيمات المحللة للبروتين. تحبس هذه الهياكل الخلايا السرطانية وتلعب دورا رئيسيا في ورم خبيث للسرطان.
لدراسة سلوك ما بعد الالتصاق للخلايا السرطانية المحاصرة في NETs في المختبر ، أولا ، قم بزراعة العدلات منخفضة الكثافة - وهي مجموعة سكانية فرعية من العدلات - في طبق مزرعة مطلي بالبوليمر يسهل ارتباط الخلية. احتضان لتنشيط العدلات لإطلاق شبكات تشبه الشبكة.
بعد ذلك ، أضف صبغة نووية فلورية خضراء غير منفذة للغشاء لتلطيخ ألياف الحمض النووي في NETs على وجه التحديد. قم بإزالة الوسط المستهلك. أضف تعليقا للخلايا السرطانية إلى مزرعة العدلات.
احتضان الثقافة لفترة قصيرة لتسهيل تفاعل الخلايا السرطانية NET. يعمل مكون الحمض النووي في NETs كعامل كيميائي يحفز هجرة الخلايا السرطانية ويساعد في التصاقها ب NETs.
قم بإزالة الوسط المستهلك. اشطف المزرعة برفق بوسائط جديدة مناسبة لإزالة أي خلايا سرطانية غير مرتبطة من طبق المزرعة. جدد بوسائط جديدة تحتوي على السيروم.
قم بتصوير الثقافة لفترة طويلة باستخدام الفحص المجهري بالفيديو بفاصل زمني لتحليل الأحداث التفاعلية بين NETs والخلايا السرطانية. بمرور الوقت ، توفر NETs بيئة مكروية مناسبة تسهل تكاثر الخلايا السرطانية. استخدم برنامجا مناسبا لمراقبة تكاثر الخلايا السرطانية على شبكات الفلورسنت الخضراء.
ثقافة وصمة عار العدلات البريتونية منخفضة الكثافة في طبق 35 ملليمتر ، طبق مطلي ببولي إل ليسين كما هو موضح ، متبوعا بغسل قصير في 2 مل من 0.1٪ BSA بالإضافة إلى RPMI 1640.
استبدل الوسط ب 1 في 10 إلى الخلايا الورمية المعدة السادسة غير الملطخة المعلقة في 2 مل من RPMI مكملة ب BSA لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة ، اشطف الخلايا في 2 مل من RPMI الطازج المكمل ب BSA لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة ، متبوعا بدوامة لطيفة لإزالة أي خلايا سرطانية غير متصلة.
بعد ذلك ، استبدل المادة الطافية ب DMEM المكملة ب FBS والمضادات الحيوية وقم بتركيب الطبق في نظام مراقبة خلية كامل الرؤية لتحليل الفاصل الزمني لاحتجاز الخلايا السرطانية بواسطة NETs.