تلطيخ الذهب المناعي للأقسام الخارجية اللونية: تقنية لتصور العلامات التشخيصية في التجويف الإغراوي

0 مشاهدات3:36 د • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإكسوسومات عبارة عن حويصلات صغيرة خارج الخلية تحيط بمجموعة متنوعة من الجزيئات الحيوية التي تعمل كمؤشرات حيوية للسرطان.

لتصور المؤشرات الحيوية الخارجية ، ابدأ بأقسام خارجية رقيقة للغاية مدمجة في الراتنج مدعومة على شبكات معدنية مناسبة للفحص المجهري الإلكتروني. احتضان الشبكات في قطرات الجلايسين. يربط الجلايسين ويحييد مجموعات الألدهيد التفاعلية في الأقسام للتغلب على تداخلها مع الفحص.

اشطف العينة بالماء لإزالة الكواشف المتبقية. بعد ذلك ، احتضان العينة في مخزن مؤقت حظر. يحمل المخزن المؤقت بروتينات مصل الدم التي تمنع مواقع ربط الأجسام المضادة غير المحددة في العينة.

بعد ذلك ، احتضان العينة في محلول الجسم المضاد الأساسي المطلوب. تتعرف هذه الأجسام المضادة وترتبط بمؤشراتها الحيوية المستهدفة الموضعية في التجويف الخارجي الخارجي. اغسل أي أجسام مضادة غير مرتبطة بمخزن مؤقت مناسب.

الآن ، انقل الشبكات الحاملة للعينات إلى قطرات تحتوي على أجسام مضادة ثانوية مترافقة بالذهب ترتبط بالأجسام المضادة الأولية. تعمل جزيئات الذهب النانوية كعلامات كثيفة الإلكترون لتصور التوطين الدقيق للجزيئات المستهدفة. اغسل أي أجسام مضادة ثانوية غير مرتبطة بمخزن مؤقت مناسب.

أخيرا ، في ظل الظروف المظلمة ، احتضان الشبكات بالتتابع في محاليل أسيتات اليورانيل وسيترات الرصاص. تعمل كواشف المعادن الثقيلة هذه على تلطيخ وتحسين تباين الجزيئات العضوية مثل الدهون والبروتينات والجليكوجينات في العينة ، مما يميزها عن الخلفية.

راقب الأقسام الملطخة تحت المجهر الإلكتروني الناقل. تظهر المؤشرات الحيوية ذات العلامات الذهبية على شكل جزيئات داكنة داخل تجويف هياكل الإكسوسوم الملطخة بالمعادن الثقيلة.

للبدء ، احتضان شبكات تحتوي على أقسام غير ملوثة بسمك 60 نانومتر في قطرات سعة 50 ميكرولتر من 0.02 متر جلايسين لمدة 10 دقائق لإخماد مجموعات الألدهيد الحرة. ثم اشطف الأقسام في 100 ميكرولتر من الماء المقطر ثلاث مرات لمدة 10 دقائق لكل منها. بعد الشطف الأخير ، احتضان الأقسام لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في PBS التي تحتوي على 1٪ BSA. بعد ذلك ، احتضان الشبكات في قطرات من 50 إلى 100 ميكرولتر من الجسم المضاد ل KRS لمدة ساعة واحدة.

بعد ذلك ، اغسل الشبكات خمس مرات لمدة 10 دقائق لكل منها في قطرة من PBS تحتوي على 0.1٪ BSA. بعد ذلك ، انقل الشبكات إلى قطرة من الجسم المضاد الثانوي المناسب واحتضان الأقسام لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. الآن ، اغسل الشبكات خمس مرات لمدة 10 دقائق لكل منها بقطرة منفصلة من PBS تحتوي على 0.1٪ BSA. قم بتلطيخ الأقسام ب 2٪ من أسيتات اليورانيل لمدة 20 دقيقة في الظلام ، متبوعا بسترات رينولد الرصاص لمدة 10 دقائق. ضع القسم الملون في مجهر إلكتروني ناقل الحركة واعرض العينة باستخدام 80 كيلو فولت وقم بتصويرها باستخدام برنامج المجهر.

11:38

طريقة مبتكرة لExosome الكمي وقياس الحجم

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:43

المبسطة الإنسان الفخاخ خارج الخلية العدلات (المستجدة) عزل والمناولة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

13:45

تقييم الدالة حويصلة خارج الخلية أثناء الإصابة بالملاريا

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:43

عزل وتوصيف المحتوية على الحمض النووي الريبي Exosomes

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:49

Nanogold وصفها نظام Endosomal خميرة التحليلات التركيبية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:24

عالية الدقة التحليل الكمي Immunogold من غشاء المستقبلات في الشبكية نقاط الاشتباك العصبي الشريط

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:49

Exosomal تحليل ميرنا في الخلية غير الصغيرة سرطان الرئة (NSCLC) المرضى البلازما من خلال QPCR: والممكنة السائل أداة خزعة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:15

نموذج إعداد وتصوير اكسوسوميس مجهر إلكتروني

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:16

توصيف واحد حويصلات خارج الخلية في الدم البشري مع تحليل تتبع نانوحبيبات المستندة إلى الأسفار السريع

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:30

باستخدام نانوبلازمون-تعزيز تشتت والتصوير المجهر منخفضه التكبير لقياس الأورام المشتقة من الورم

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 1 أغسطس 2026