التلوين السلبي للإكسوسومات المنقاة: إجراء لتصور مورفولوجيا الإكسوسوم باستخدام المجهر الإلكتروني للإرسال

لإجراء تلطيخ سلبي للإكسوسومات - حويصلات كروية بحجم النانو - ابدأ بأخذ شبكة مجهرية إلكترونية مناسبة. قم بإعداد الشبكة باستخدام مفرغ توهج. هذه العملية تجعل سطح الشبكة محبا للماء لتحسين التصاق العينات.

في الوقت نفسه ، خذ تعليقا من الإكسوسومات المنقاة في أنبوب. استكمل الأنبوب ببارافورمالدهيد - مثبت عينة - واحتضانه. يخترق بارافورمالدهيد الإكسوسومات ويربط البروتينات والأحماض النووية. هذه الخطوة حيوية للحفاظ على مورفولوجيا الإكسوسوم.

الآن ، قم بتحميل تعليق الإكسوسوم على الشبكة المعدة مسبقا واحتضانها للسماح بحدوث الامتزاز. بعد ذلك ، أضف بضع قطرات من أسيتات اليورانيل ، وهي بقعة معدنية ثقيلة ، فوق الشبكة. ترتبط أيونات اليورانيل ببروتينات الغشاء والدهون ، وتشكل رواسب حول حدود الإكسوسوم.

أخيرا ، اغسل الشبكة بالماء لإزالة البقعة الزائدة. اترك الشبكة تجف وتصور باستخدام الفحص المجهري الإلكتروني أو TEM.

عندما يصطدم شعاع الإلكترون بالإكسوسومات ، فإن البقعة المحيطة بالعينة تشتت المزيد من الإلكترونات. كون الإكسوسومات أقل كثافة للإلكترون ، تسمح للحزمة بالمرور. يتم التقاط هذه الإلكترونات المتناثرة بشكل مختلف بواسطة نظام التصوير لتشكيل صورة عالية التباين.

تبدو الإكسوزومات الملطخة سلبا أفتح ، مع حدود داكنة حولها.

من أجل إجراء تلطيخ سلبي ، قم بإصلاح الإكسوسومات المنقاة بعد العزل باستخدام 1 مليلتر من 2٪ با