التجميد المفاجئ للأنسجة العضلية للتقسيم: بروتوكول للحصول على أقسام رقيقة جدا من أنسجة عضلات الفئران المجمدة بسرعة
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:30 دقيقة • April 30th, 2023
التجميد المفاجئ هو تقنية يتم من خلالها تجميد عينات الأنسجة بسرعة إلى درجات حرارة شديدة البرودة. يساعد في الاحتفاظ بالبنية الأصلية للحمض النووي والحمض النووي الريبي والبروتينات داخل الأنسجة.
لتجميد عضلة الأطراف ، ابدأ بأخذ أنسجة عضلية مستخرجة حديثا من الطرف الخلفي للفأر.
بعد ذلك ، خذ النيتروجين السائل في صندوق من الستايروفوم واغمر دورق يحتوي على الأيزوبنتان - سائل عالي التوصيل - في النيتروجين السائل.
قم بتجميد الأيزوبنتان حتى يصبح المحلول لزجا. في نفس الوقت ، ضع قطرة من وسائط التجميد السائلة فوق قطعة من الفلين.
ضع الأنسجة العضلية الخلفية عن طريق إمساك الوتر وتضمين قطعة الأنسجة عموديا في وسط التجميد السائل. يساعد هذا الاتجاه في التحديد اللاحق لمنطقة المقطع العرضي للعضلة.
اغمر قطعة الفلين بأنسجة عضلية متصلة لفترة وجيزة في حمام الأيزوبنتان المبرد مسبقا. هذا يساعد في تجميد الأنسجة العضلية بسرعة وحتى حتى الأنسجة العضلية.
يتجمد وسط التجميد عند درجة حرارة منخفضة ويشكل طبقة هلامية حول الأنسجة العضلية ، وتثبتها في مكانها. ضع كتلة العضلات في ميكروتوم بالتبريد للحصول على أقسام مقطعة إلى شرائح رفيعة.
ضع الأقسام على شرائح زجاجية وقم بتخزينها في درجة حرارة منخفضة لمزيد من التحليل النسيجي.
عندما يتم جمع جميع العضلات ، اغمر النصف السفلي من دورق بلاستيكي سعة 50 مليلتر يحتوي على الأيزوبنتان في النيتر
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية