عزل الخلايا أحادية النواة Lamina Propria: تقنية طرد مركزي متدرج الكثافة القائمة على السيليكا للحصول على خلايا أحادية النواة من القولون الفئران
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:01 دقيقة • April 30th, 2023
تتكون الصفيحة المعوية ، الواقعة أسفل ظهارة الأمعاء ، من نسيج ضام فضفاض جنبا إلى جنب مع شبكة كثيفة من ألياف الكولاجين تحتوي على مجموعة متنوعة من الخلايا مثل الخلايا الليفية والخلايا أحادية النواة ، بما في ذلك الخلايا الليمفاوية والخلايا الوحيدة. تلعب هذه الخلايا دورا مهما في الحفاظ على التوازن.
لعزل الخلايا أحادية النواة ، ابدأ بأخذ شظايا القولون الفأر. عالج الشظايا بمحلول هضم يحتوي على إنزيمات الكولاجيناز. تهضم إنزيمات الكولاجيناز ألياف الكولاجين داخل الأنسجة ، وتطلق الخلايا في حالة تعليق.
اجمع المادة الطافية وقم بتصفيتها من خلال مصافي الخلايا لإزالة الأنسجة غير المهضومة والحطام والحصول على معلق أحادي الخلية. أضف حاجزا مبردا إلى المرشح لتعطيل إنزيمات الكولاجيناز.
جهاز طرد مركزي لفصل الخلايا. تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على الإنزيمات وأعد تعليق حبيبات الخلية في وسط فصل منخفض الكثافة قائم على السيليكا. بعد ذلك ، ضع طبقة من التعليق فوق وسائط فصل عالية الكثافة قائمة على السيليكا لإنشاء تدرج فصل.
الطرد المركزي الخليط. ترسب الخلايا أحادية النواة وتشكل طبقة بيضاء عند الواجهة بين طبقات تدرج الكثافة. انقل طبقة الواجهة البيضاء بعناية إلى أنبوب جديد يحتوي على مخزن مؤقت مناسب.
جهاز طرد مركزي للحصول على حبيبات تحتوي على خلايا أحادية النواة منقاة. أعد تعليق الحبيبات في المخزن المؤقت لمزيد
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية