عزل الغدد القاعية المعدية: طريقة لعزل الغدد القاعية من أنسجة المعدة البشرية

في البشر ، قاع العين هو الجزء العلوي من المعدة. تتكون ظهارة قاع الرحم من العديد من الغدد المعدية التي تفرز عصير المعدة ، مما يساعد في الهضم.

لعزل الغدد القاعية المعدية ، ابدأ بأخذ أنسجة قاع الرحم البشرية في دورق أضف حاجزا مناسبا إلى الدورق واغسل أنسجة قاع الأساس بقوة. يزيل الغسيل الحطام الملوث والدم من أنسجة قاع القاع.

انقل الأنسجة النظيفة إلى صفيحة بتري. باستخدام شاش معقم ، امسح الطبقة المخاطية الواقية ، وبالتالي تعريض الطبقة الظهارية الأساسية. باستخدام الملقط ، اكشط الطبقة الظهارية العلوية بقوة من الأنسجة.

انقل الظهارة المكشطة إلى صفيحة بتري أخرى وفرمها إلى قطع أصغر. أضف القطع المفرومة إلى قارورة تحتوي على مخزن مؤقت مكمل بإنزيمات الكولاجيناز. احتضان في درجة الحرارة المطلوبة مع التحريض المستمر لمنع التكتل.

يهضم الكولاجيناز بروتينات المصفوفة خارج الخلية الموجودة في الطبقة الظهارية ، ويطلق الغدد القاعية المنفصلة في التعليق. قم بتصفية المعلق في أنبوب جديد لإزالة أي كتل غير منفصلة.

حافظ على المرشح الغدي دون إزعاج على الجليد لترسيب الغدد. تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على بقايا الخلية وأعد تعليق الرواسب الغدية في مخزن مؤقت جديد. جهاز طرد مركزي وتخزين الحبيبات الغدية حتى الاستخدام الآخر.

للبدء ، اجمع الأنسجة المحضرة في وعاء بلاستيكي كبير مملوء ب DPBS الخالي من الكالسيوم / المغنيسيوم. اترك الحاوية البلاستيكية على الثلج حتى الاستخدام. بعد ذلك ، بمساعدة الملقط ، اغسل الأنسجة بقوة في دورق معقم ، يحتوي على 100 مل من DPBS الخالي من الكالسيوم / المغنيسيوم ، لمدة 30 ثانية تقريبا. ثم استخدم شاشا معقما لمسح طبقة المخاط من الظهارة.

بعد ذلك ، استخدم ملقطا كبيرا لتثبيت طبقة العضلات من الأنسجة بإحكام. ثم استخدم ملقطا مرقئا منحنيا كبيرا وكشط الظهارة بقوة. قم بتخزين الظهارة المكشطة في طبق بتري من البوليسترين المعقم. لتحسين هضم الأنسجة ، افرم الأنسجة الظهارية إلى شظايا. ثم اغسل الأنسجة ب DPBS الخالي من الكالسيوم / المغنيسيوم المكمل بالمضادات الحيوية.

يغسل عدة مرات لإزالة الدم. تخلص من الغسيل في دورق النفايات. بعد ذلك ، اجمع الأجزاء الظهارية المغسولة في قارورة زجاجية مستديرة سعة 125 مليلتر مع قضيب تقليب سعة 25 مليلتر ووسط حضانة مسخن مسبقا. بعد جمع شظايا الأنسجة ، أغلق القارورة السفلية المستديرة بحاجز مطاطي. ثم أدخل إبرة شوكية 20 جرام في الحاجز. قم بتوصيل الحاجز بخزان الأكسجين باستخدام خراطيم مطاطية.

أدخل 10 إلى 15 إبرة تدفق في الحاجز لمنع تمزقه ثم استخدم المشابك لتأمين الإعداد على حامل الحلقة. ثم قم بتشغيل تدفق الأكسجين على مستوى منخفض. بعد ذلك ، قم بمعايرة الحمام المائي عند 37 درجة مئوية على طبق التحريك لمدة 30 إلى 45 دقيقة. بمجرد المعايرة ، ضع الإعداد في الحمام المائي. بعد 15 دقيقة من الحضانة ، تحقق من وجود غدد منفصلة.

بعد وقت الحضانة المطلوب، أضف 50 مل من DMEM/F-12 المسخن مسبقا إلى وسط الحضانة باستخدام ماصة مصلية. بعد ذلك ، قم بتصفية خليط الغدة الذي تم الحصول عليه من خلال شاش معقم في أربعة أنابيب مخروطية سعة 50 ملليلترا. ثم احتضن المرشح على الجليد لمدة 15 دقيقة. سيسمح ذلك للغدة بالاستقرار في قاع الأنبوب المخروطي. استخدم ماصة مصلية للتخلص من 40 مل من المادة الطافية من أعلى معلق الغدة.

أعد تعليق 10 مل المتبقية من خليط الغدة في 10 ملليلتر من DPBS مكمل بالمضادات الحيوية. ثم قم بتوزيع الخليط بالكامل في أنابيب اختبار زراعة الخلايا سعة 5 ملليلتر. قم بالطرد المركزي للأنابيب عند 65 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة المادة الطافية بعناية.