عزل واستزراع الخلايا الظهارية لسان الفئران: إجراء لعزل وزراعة الخلايا الظهارية للسان من نموذج الفأر

يشكل اللسان ظهارة حرشفية طبقية وطبقة أساسية من النسيج الضام الكثيف تسمى الصفيحة المخصوصة. تتكون الظهارة من خلايا ظهارية حرشفية متعددة الطبقات توفر الحماية ضد الإجهاد الميكانيكي.

لعزل الخلايا الظهارية ، ابدأ بلسان الفأر الذي تم حصاده حديثا. افرم اللسان للحصول على شظايا أنسجة أصغر. بعد ذلك ، عالج الأجزاء بكوكتيل هضم مخصص يحتوي على إنزيمات الكولاجيناز والهيالورونيداز وديوكسيربونوكلياز.

تهضم إنزيمات الكولاجيناز والهيالورونيداز المصفوفة خارج الخلية التي تربط الأنسجة معا ، مما يعزز إطلاق الخلايا الفردية في المعلق. يحط ديوكسيربونوكلياز أي حمض نووي حر ينطلق من الخلايا المحللة.

أضف عازلة تحتوي على مصل إلى العينة المهضومة لتعطيل إنزيمات التحلل المائي للبروتين. الآن ، قم بتصفية العينة من خلال مصافي الخلايا لإزالة أي شظايا أنسجة غير مهضومة وحطام والحصول على تعليق أحادي الخلية للخلايا الظهارية.

جهاز طرد مركزي لفصل الخلايا. تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على مزيج الهضم. أعد تعليق حبيبات الخلية في وسائط جديدة. أخيرا ، انقل الحجم المطلوب من تعليق الخلية هذا إلى طبق ثقافة معقم. احتضان الثقافة.

تلتصق الخلايا الظهارية بالسطح السفلي لطبق الثقافة. اعتمادا على القدرة التكاثرية للخلايا الظهارية الفردية ، فإنها تبدأ في تكوين مستعمرات.

ابدأ باستخدام مقص جراحي لحصاد اللسان من ذكر أو أنثى فأر معدل وراثيا