موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 2:36 دقيقة • April 30th, 2023
أثناء التلقيح داخل الغشاء المخاطي ، يتم تسليم الخلايا السرطانية المطابقة للنمط النسيجي للأنسجة المخاطية إلى الأنسجة المخاطية للحيوان المتلقي.
للبدء ، قم بتقييد الفأر المخدر من رقبته على منصة جراحية لتسهيل الوصول إلى فمه.
قم بإعداد تعليق للخلايا السرطانية شديدة الانتشار في مصفوفة غشاء القاعدية المبردة في حقنة. تمنع درجة الحرارة المنخفضة التعليق من التصلب.
حقن هذا التعليق بعناية في الخد الداخلي أو المنطقة الشدقية من الفأر. تصطف منطقة الخد الشدقي على جانبيها الغشاء المخاطي الشدقي ، المحاط بشبكة من الأوعية الدموية واللمفاوية.
تأكد من التوصيل الكامل لتعليق الخلايا السرطانية وسحب الإبرة برفق. اسمح للمصفوفة بترسيخ الخلايا بداخلها وتضمينها.
اسمح للماوس بالتعافي. في غضون أيام من الحقن، يتطور الورم الأولي في موقع الحقن. في النهاية ، قد تنتقل خلايا هذا الورم ذات الإمكانات النقيلية العالية عبر الجهاز اللمفاوي وتتسرب إلى الغدد الليمفاوية.
تتكيف هذه الخلايا السرطانية مع بيئتها المكروية الجديدة وتتكاثر وتؤسس مستعمرات نقيلية في الغدد الليمفاوية.
مباشرة قبل الحقن ، قم بخلط الخلايا بنسبة 1 إلى 1 من تعليق الخلايا السرطانية إلى نسبة مصفوفة الغشاء القاعدي على الجليد. قم بتحميل حقنة واحدة سعة 0.5 ملليلتر مزودة بإبرة 23G مع 100 ميكرولتر من الخلايا لكل متلقي. ضع المحاقن على الثلج ، وتأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم في فأر مخدر.
بعد ذلك ، أدخل الإبرة في المنطقة الشدقية اليمنى أو اليسرى من خلال المساحة المفتوحة المتاحة على جانبي الفم ، مع الحفاظ على المحقنة موازية لمنطقة الخد أثناء وجودها داخل تجويف الفم ، لتسهيل حقن الحجم الكامل البالغ 100 ميكرولتر من تعليق مصفوفة الغشاء القاعدي للخلية على مدى 5 ثوان. احتفظ بالحقنة في مكانها لمدة 5 ثوان إضافية للتأكد من حقن جميع المواد قبل سحب المحقنة برفق. ستصبح الأورام مرئية بشكل كبير في غضون أسبوع تقريبا.