المعالجة المسبقة للأنسجة FFPE ل RNA CISH: إجراء لمعالجة أقسام الأنسجة المضمنة في البارافين الثابتة بالفورمالين للتهجين الموضعي للحمض النووي الريبي الكروموجيني في الموقع
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:53 دقيقة • April 30th, 2023
تسهل المعالجة المسبقة لأقسام أنسجة البارافين أو FFPE المثبتة بالفورمالين التعرض للأحماض النووية وتمكن من ربط المجسات المصنفة بالتسلسل المستهدف أثناء التهجين اللاحق في الموقع. بالإضافة إلى ذلك ، تساعد المعالجة المسبقة في الحفاظ على سلامة الأحماض النووية داخل الخلايا ومورفولوجيا الأنسجة بشكل عام.
للبدء ، خذ شريحة زجاجية تحمل قسم أنسجة FFPE منزوع البارافينات والمعاد ترطيبه محل اهتمام. عالج الأنسجة بتركيز مناسب من بيروكسيد الهيدروجين واحتضنها.
يعطل بيروكسيد الهيدروجين بشكل لا رجعة فيه البيروكسيديز الداخلي ، الموجود فسيولوجيا في الخلايا. تلغي عملية الحظر هذه إمكانية إشارات الخلفية غير المحددة أثناء خطوات التهجين اللاحقة.
بعد ذلك ، اغمر قسم الأنسجة في حمام ساخن يحتوي على مخزن مؤقت مناسب لاسترجاع المستضد. احتضان للمدة المطلوبة. تشق درجة الحرارة المرتفعة الروابط المتشابكة الكيميائية التي يسببها المثبت في البروتينات والأحماض النووية ، مما يعرض الحلقات غير المقنعة للمجسات أثناء وضع العلامات اللاحقة.
أخيرا ، عالج العينة بمحلول بروتياز مناسب. احتضن في بيئة يتم التحكم فيها بالرطوبة. تزيد البروتياز من إمكانية الوصول إلى الحمض النووي الريبي ، مما يسهل المجسات المحددة للوصول إلى تسلسلها المستهدف في خطوات التهجين التالية.
اغسل القسم بالماء لإزالة أي بروتياز متبقية. استخدم قسم الأنسجة المعالجة مسبقا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية