موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:26 دقيقة • April 30th, 2023
للكشف عن تسلسل RNA معين في الخلية ، ابدأ بأخذ قسم من الأنسجة على شريحة زجاجية. قم بتراكب قسم الأنسجة بمخزن مؤقت تهجين مناسب يحتوي على مجسات الحمض النووي الريبي المستهدفة.
هذه المجسات عبارة عن جزيئات الحمض النووي الريبي على شكل Z لها جزء التعرف على الهدف في أحد طرفيه وتسلسل الذيل في الطرف الآخر. يربط ذراع فاصل بين هذين الطرفين.
الآن ، احتضان الشريحة في فرن تهجين عند درجة حرارة مثالية. تدخل مجسات الحمض النووي الريبي على شكل Z إلى الخلية وتهجن مع تسلسل mRNA المستهدف المقابل في أزواج.
أخرج الشريحة من الفرن. اغمر الشريحة في محلول غسيل لإزالة أي مجسات غير مرتبطة ومخزن مؤقت للتهجين الزائد.
بعد ذلك ، أضف محلول مضخم مسبقا واحتضن. يرتبط جزيء المضخم المسبق بتسلسل الذيل لمجسين Z متجاورين. لا يرتبط هذا الجزيء بمسبار Z واحد ، مما يضمن الخصوصية.
بعد ذلك ، أضف خليط كاشف مكبر الصوت واحتضنه. تهجين جزيئات مكبر الصوت المتعددة إلى تسلسل مضخم الصوت الأولي الفردي.
أخيرا ، قم بتسمية قسم الأنسجة بمجسات الملصقات المطلوبة للكشف عن وجود تسلسل RNA معين في الخلية.
لبدء التهجين ، انقر فوق الشرائح وقم بنقرها لإزالة أي سائل زائد ووضعها مرة أخرى في رف الشرائح. أخرج مسبار فيروس الورم الحليمي البشري المسخن مسبقا من الفرن وأضف ما يقرب من أربع قطرات لتغطية كل قسم بالكامل. غطي الصينية بغطاء وأدخليها في الفرن لمدة ساعتين على حرارة 40 درجة مئوية. بعد الانتهاء من الحضانة ، أخرج الصينية من الفرن وقم بإزالة رف الانزلاق.
شريحة واحدة في كل مرة ، قم بإزالة أي سائل زائد بسرعة وضع الشريحة في رف منزلق مغمور في طبق تلطيخ مملوء بمخزن غسيل 1x ، وغسل الشرائح لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة مع تحريك مستمر ، وكرر ذلك مع مخزن غسيل طازج 1x. انقر وقم بالتمرير لإزالة أي سائل زائد من الشرائح ووضعها في رف الشرائح مرة أخرى. أضف ما يقرب من أربع قطرات من درجة حرارة الغرفة AMP1 لكل قسم لتغطية كل قسم بالكامل. غطي الصينية بغطاء وأدخليها في الفرن لمدة 30 دقيقة عند 40 درجة مئوية.
بعد إخراج الصينية من الفرن ، قم بإزالة رف الانزلاق. اعمل شريحة واحدة في كل مرة ، وقم بإزالة أي سائل زائد بسرعة وضع الشريحة في رف الشرائح المغمور في طبق تلطيخ مملوء بمخزن غسيل 1x ، واغسله لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة مع تحريك مستمر ، وكرر ذلك مع مخزن غسيل جديد 1x.