تهجين المسبار وتضخيم الإشارة في تهجين الحمض النووي الريبي في الموقع: تقنية للكشف عن تسلسلات الحمض النووي الريبي المحددة في أقسام الأنسجة

للكشف عن تسلسل RNA معين في الخلية ، ابدأ بأخذ قسم من الأنسجة على شريحة زجاجية. قم بتراكب قسم الأنسجة بمخزن مؤقت تهجين مناسب يحتوي على مجسات الحمض النووي الريبي المستهدفة.

هذه المجسات عبارة عن جزيئات الحمض النووي الريبي على شكل Z لها جزء التعرف على الهدف في أحد طرفيه وتسلسل الذيل في الطرف الآخر. يربط ذراع فاصل بين هذين الطرفين.

الآن ، احتضان الشريحة في فرن تهجين عند درجة حرارة مثالية. تدخل مجسات الحمض النووي الريبي على شكل Z إلى الخلية وتهجن مع تسلسل mRNA المستهدف المقابل في أزواج.

أخرج الشريحة من الفرن. اغمر الشريحة في محلول غسيل لإزالة أي مجسات غير مرتبطة ومخزن مؤقت للتهجين الزائد.

بعد ذلك ، أضف محلول مضخم مسبقا واحتضن. يرتبط جزيء المضخم المسبق بتسلسل الذيل لمجسين Z متجاورين. لا يرتبط هذا الجزيء بمسبار Z واحد ، مما يضمن الخصوصية.

بعد ذلك ، أضف خليط كاشف مكبر الصوت واحتضنه. تهجين جزيئات مكبر الصوت المتعددة إلى تسلسل مضخم الصوت الأولي الفردي.

أخيرا ، قم بتسمية قسم الأنسجة بمجسات الملصقات المطلوبة للكشف عن وجود تسلسل RNA معين في الخلية.

لبدء التهجين ، انقر فوق الشرائح وقم بنقرها لإزالة أي سائل زائد ووضعها مرة أخرى في رف الشرائح. أخرج مسبار فيروس الورم الحليمي البشري المسخن مسبقا من الفرن وأضف ما يقرب من أربع قطرات لتغطية كل قسم بالكامل. غطي الصينية بغطاء وأدخليها في الفرن لمدة ساعتين