اكتشاف إشارة الحمض النووي الريبي CISH: تقنية للكشف عن الإشارات الكروموجينيكية أثناء تهجين الحمض النووي الريبي في الموقع في عينات الأنسجة السليمة

للكشف عن الإشارات الكروموجينيكية أثناء تهجين الحمض النووي الريبي ، ابدأ بأخذ قسم من الأنسجة على شريحة زجاجية. يحتوي هذا القسم على الحمض النووي الريبي المستهدف ، مهجن مسبقا باستخدام مسبار الحمض النووي الريبي المسمى بيروكسيداز الفجل.

استغن عن بضع قطرات من ديامينوبنزيدين أو DAB ، وهي ركيزة للكشف ، فوق قسم الأنسجة واحتضنها.

يدخل DAB إلى الخلية ، ويقوم إنزيم بيروكسيداز الفجل بأكسدة لتشكيل راسب بني. يضفي هذا التفاعل لونا بنيا على تسلسلات محددة من الحمض النووي الريبي في الخلية. الخلايا التي لا تحتوي على الحمض النووي الريبي المستهدف لن يكون لها نشاط بيروكسيداز وتبقى غير ملطخة.

بعد ذلك ، قم بمواجهة قسم الأنسجة بالهيماتوكسيلين. يرتبط الهيماتوكسيلين بالحمض النووي ويضفي صبغة أرجوانية على قسم الأنسجة.

عالج قسم الأنسجة بماء الأمونيا - محلول زرق. يقلل من شدة البقعة الأرجوانية ، مما يجعل الخلايا تبدو زرقاء. هذه الخطوة ضرورية للتصور الواضح للبقع البنية داخل الخلايا.

الآن ، اغمر قسم الأنسجة في زيادة تركيزات الإيثانول ثم عالجها بالزيلين - مذيب عضوي. تعمل هذه الخطوات على تجفيف قسم الأنسجة للحصول على صور أفضل.

أخيرا ، أغلق الشريحة بمحلول تثبيت وغطاء وتصور تحت المجهر الضوئي. تظهر الخلايا نقاطا بنية مثقبة تشير إلى وجود الحمض النووي الريبي المستهدف.

قم بتوزيع نفس عدد القطرات من كل محلول DAB-A و DAB-B في أنبوب بحجم مناسب لصنع ما يقرب من 120 ميكرولتر من ركيزة DAB لكل قسم ودوامة. خذ كل شريحة ، واحدة تلو الأخرى ، من رف الشرائح واضغط ونقر لإزالة السوائل الزائدة ، وضعها مرة أخرى في رف الشرائح. الماصة ما يقرب من 120 ميكرولتر من خليط DAB على كل قسم من أقسام الأنسجة ، مع التأكد من تغطية الأقسام. احتضن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة واستمر في مكافحة التلوين.

ضع قطرة واحدة من وسط التثبيت لكل شريحة زجاجية ثم ضع الشريحة على الشرائح واتركها تجف في الهواء. بعد بضع ساعات ، تابع التقييم باستخدام المجهر البصري كما هو موضح في المخطوطة.

• Chromogenic In Situ Hybridization (CISH) - Technique for detecting RNA or DNA sequences.
• Diaminobenzidine (DAB) - Detection substrate used in CISH testing.
• Horseradish Peroxidase - Enzyme that oxidizes DAB during RNA hybridization.
• Hematoxylin - Stain that binds to DNA during CISH technique.
• Chromogenic Materials - Substances that produce a colour when exposed to radiation.

• Introduce CISH - It's a molecular technique for detecting specific sequences of DNA or RNA (e.g., CISH testing).
• Key Concepts - Horseradish peroxidase oxidizes DAB to create a signal (e.g., CISH technique).
• Underlying Mechanisms - Staining and de-staining processes reveal target RNA (e.g., CISH staining).
• Connect to Experiment - Signals seen under microscope confirm presence of target RNA.

• What is CISH and how does it enable RNA and DNA detection?
• How does the oxidation of DAB works in the CISH technique?
• Why is the staining and de-staining process critical for the CISH procedure?

• Practical Applications - CISH testing aids in disease diagnostics (e.g., biomedical research).
• Industry Impact - Developments in diagnostic techniques (e.g., healthcare).
• Societal Importance - Improves disease detection rates (e.g., public health).
• Link to Scientific Advancements - Continued innovation in chromogenic materials and techniques.