تضمين الأجسام الكروية ثلاثية الأبعاد في قطرات هلام الاغاروز: تقنية للحفاظ على المركبات الكروية لتحليل المصب
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 2:59 دقيقة • April 30th, 2023
الكرويات عبارة عن مجاميع خلوية كروية ثلاثية الأبعاد في المختبر تحاكي البيئة المكروية للورم في الجسم الحي وتساعد في دراسة تطور الورم. للحفاظ على هذه الكرويات عن طريق التضمين ، ابدأ بأخذ أنبوب معقم يحتوي على كرويات في المخزن المؤقت المطلوب.
عالج الكرويات مع بارافورمالدهايد. يربط بارافورمالدهيد البروتينات الخلوية ، مما يؤدي إلى استقرار بنية الخلية والحفاظ عليها. الطرد المركزي للكرات وإزالة المادة الطافية المحتوية على بارافورمالدهايد. أعد تعليق الحبيبات الكروية في المخزن المؤقت.
بعد ذلك ، قم بإعداد التركيز المطلوب لمحلول هلام الاغاروز المنصهر. اصنع قطرة جل الاغاروز على شريحة مجهرية. حافظ على الشريحة على كتلة تسخين لتجنب تصلب الاغاروز.
باستخدام ماصة دقيقة ذات طرف فتحة عريضة ، اجمع الكرويات من الأنبوب. قم بتقطيع الكرات بعناية في وسط قطرة هلام الاغاروز دون لمس شريحة المجهر. بعد ذلك ، قم باحتضان الشريحة عند درجة حرارة مناسبة للسماح ل ECM بترسيخ الكرات بداخلها وحبسها.
انقل القطرة شبه الصلبة برفق من شريحة المجهر إلى شريط الأنسجة. قم بتخزين الكرويات المضمنة في الإيثانول حتى مزيد من التحليل النهائي.
للبدء ، قم بإصلاح الكرويات في غطاء الدخان في اليوم الأول كما هو موضح في بروتوكول النص. في اليوم الثاني ، ضع جل الاغاروز في دورق مملوء بالماء في فرن ميكروويف لتسخينه ، واحتفظ بالجل دافئا على لوح تسخ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية