موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 2:22 دقيقة • April 30th, 2023
الطحن المبرد أو الطحن بالتبريد هو تقنية تسمح بتبريد عينات الأنسجة منزوعة الخلايا إلى درجات حرارة منخفضة للغاية وطحنها إلى مسحوق ناعم مع الاحتفاظ بتركيبتها الكيميائية الحيوية.
للبدء ، احصل على مصفوفة خارج الخلية منزوعة الخلايا مشتقة من الأنسجة المجففة بالتجميد أو ECM ذات أهمية. افرمه للحصول على شظايا صغيرة.
بعد ذلك ، انقل شظايا ECM المفرومة إلى وعاء طحن. أدخل كرات الطحن في جرة الطحن. اغمر جرة الطحن المحملة في النيتروجين السائل لتجميد العينة عند -196 درجة مئوية.
قم بتحميل البرطمان المبرد في نظام التبريد. إخضاع العينة المجمدة للطحن بالتبريد بتردد مناسب للمدة المطلوبة.
أثناء الطحن بالتبريد ، يتأرجح جرة الطحن شعاعيا في الوضع الأفقي. نتيجة لذلك ، فإن القصور الذاتي لكرات الطحن يسهل لها التأثير على العينة المجمدة بطاقة عالية في الأطراف المستديرة للجرة وسحقها.
بالإضافة إلى ذلك ، فإن حركة جرة الطحن إلى جانب حركة كرات الطحن تعزز الخلط المكثف للعينة للحصول على مسحوق ناعم مع توزيع موحد لحجم الجسيمات.
الآن ، انقل مسحوق ECM المطحون بالتبريد إلى قارورة زجاجية. أغلق القارورة بإحكام لمنع التعرض للرطوبة. جفف العينة حتى الاستخدام مرة أخرى.
استخدم مقصا جراحيا حادا لفرم الأنسجة منزوعة الخلايا. لتبريد الأنسجة المعالجة ، املأ غرفة طحن من الفولاذ المقاوم للصدأ سعة 25 مليلتر لنظام مطحنة كروية مختبرية باستخدام ECM مجفف بالتجميد المفروم وأضف كرتين لطحن من الفولاذ المقاوم للصدأ مقاس 10 ملم.
أغلق غرفة الطحن المحملة واغمرها بالكامل في النيتروجين السائل لمدة 3 دقائق. ثم قم بطحن العينة المجمدة على 30 هرتز لمدة 3 دقائق. كرر الغمر في النيتروجين السائل والطحن حتى يتم طحن ECM إلى مسحوق ناعم.